[发明专利]一种蓝莓内参基因及其引物和应用

说明书

本发明公开了一种用于蓝莓内参基因的实时荧光定量PCR引物对，包括针对蓝莓actin7基因的PCR引物对和/或针对蓝莓TUB基因的PCR引物对。前述实时荧光定量PCR引物对中的引物特异性强，具有很高的稳定性、可靠性和重复性，为在ABA胁迫等逆境胁迫下蓝莓相关功能基因的精确定量研究提供有力支持，提高了研究的可靠性。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及一种蓝莓内参基因及其引物和应用，特别涉及蓝莓actin7基因和/或蓝莓TUB基因作为蓝莓内参基因及其引物和应用。

背景技术

蓝莓(Vaccinium Spp)为杜鹃花科越橘属多年生低灌木。原生于北美州与东亚，分布于朝鲜、蒙古、欧洲、北美洲以及中国黑龙江、内蒙古、吉林长白山等地区。蓝莓果实中营养丰富，富含花青素，具有防止脑神经老化、强心、抗癌、软化血管、增强人体免疫等功能。因为其具有较高的保健价值而风靡世界，是世界粮食及农业组织推荐的五大健康水果之一。然而，在栽培过程中蓝莓植株时常会受到多种逆境胁迫的影响。因此，提高植物自身对逆境胁迫的生存力是蓝莓育种工作的目标之一。而育种过程中就经常检测不同转录本的表达量，为了准确定量，就需要有效的内参基因。

理想的内参基因应该是在不同组织类型、不同生长阶段及不同环境条件下保持表达水平恒定。然而，尚未报道适用于所有不同条件的内参基因。因此，根据实验条件和实验材料筛选合适的内参基因，已成为应用实时荧光定量PCR进行基因组功能分析的重要前提。

目前，蓝莓常见内参基因如18S rRNA基因、HIS、GAPDH等，其它关于蓝莓逆境条件下内参基因的克隆及内参基因稳定性筛选的研究未见报道。如大多数植物在逆境条件下18S rRNA的表达量较高，当目的基因表达量低时18S rRNA不适合作为内参基因，此时最好配合其他内参基因一起使用，以提高qRT-PCR定量的准确性。因此，在研究蓝莓逆境条件下功能基因表达中缺少合适的内参基因。

发明内容

本发明通过从蓝莓基因组数据获得内参基因，利用BestKeeper、NormFinder和RefFinder分析软件和Delta Ct法对该基因的稳定性进行评价，表明两个内参基因适用于蓝莓ABA胁迫条件下基因表达研究，并用该基因为基因设计了实时荧光定量PCR引物，为后续蓝莓功能基因的精确定量及功能研究奠定基础。

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了下面的技术方案。

本发明第一方面提供了一种用于PCR反应的蓝莓内参基因，所述内参基因为蓝莓actin7基因和/或蓝莓TUB基因。

本发明第二方面提供了一种用于蓝莓内参基因的实时荧光定量PCR引物对，所述PCR引物对包括针对蓝莓actin7基因的PCR引物对和/或针对蓝莓TUB基因的PCR引物对。

在一些实施方式中，以蓝莓actin7基因的成熟mRNA或所述蓝莓actin7基因的成熟mRNA的片段为模板，设计得到所述针对蓝莓actin7基因的PCR引物对。

在一些实施方式中，所述蓝莓actin7基因的成熟mRNA的片段为蓝莓actin7基因的mRNA编码序列片段。

在一些实施方式中，以SEQ ID NO.5所示RNA序列为模板，设计得到所述针对蓝莓actin7基因的PCR引物对。

在一些实施方式中，所述针对蓝莓actin7基因的PCR引物对的特异性部分分别如SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示。

在一些实施方式中，以蓝莓TUB基因的成熟mRNA或所述蓝莓TUB基因的成熟mRNA的片段为模板，设计得到所述针对蓝莓TUB基因的PCR引物对。

在一些实施方式中，所述蓝莓TUB基因的成熟mRNA的片段为蓝莓TUB基因的mRNA编码序列片段。