[发明专利]高效合成麦角硫因的工程菌的构建方法与应用

权利要求书

1.一种基因工程菌，其特征在于，所述的基因工程菌为：在宿主细胞大肠杆菌中重组表达了来源于Mycolicibacterium smegmatis的麦角硫因合成基因簇egtBCDE、核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示麦角硫因生物合成蛋白1的编码基因egt1和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的谷氨酸-半胱氨酸连接酶的编码基因egtA的基础上，并进行如下（a）~（e）任一改造：

（a）表达核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的突变体hisG^G233H,T235Q的编码基因；

（b）表达GeneID为945803的编码天冬氨酸激酶thrA基因；

（c）表达核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示丝氨酸乙酰转移酶CysE的突变基因cysE^T167A；

（d）表达核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的磷酸甘油酸脱氢酶SerA的截短基因serA^T410STOP；

（e）表达GeneID为945803的编码天冬氨酸激酶thrA基因和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的磷酸甘油酸脱氢酶SerA的截短基因serA^T410STOP。

2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述的麦角硫因合成基因簇egtBCDE以pRSFDuet-1为表达载体；编码麦角硫因生物合成蛋白1的基因、编码谷氨酸-半胱氨酸连接酶的基因、ATP磷酸核糖基转移酶HisG的基因突变体hisG^G233H,T235Q、编码天冬氨酸激酶ThrA的基因、丝氨酸乙酰转移酶CysE的突变基因cysE^T167A、磷酸甘油酸脱氢酶SerA的截短基因serA^T410STOP以pCDFDuet-1为表达载体。

3.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述宿主细胞大肠杆菌为大肠杆菌BL21(DE3)。

4.一种合成麦角硫因的方法，所述方法是利用权利要求1-3任一所述基因工程菌发酵生产麦角硫因。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，将所述基因工程菌接种至摇瓶体系中，在25-35℃下培养1-2 h，加入0.1-0.5 mM IPTG进行诱导；或将所述基因工程菌接种至发酵罐体系中，在25-35℃，1-5vvm通气量，25-30%溶氧，pH在6-7之间培养4小时，加入0.1-0.5 mMIPTG进行诱导培养。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，将所述基因工程菌加入反应体系中，在25-35℃、pH在6~7下培养，培养4 h加入IPTG诱导，总共培养不少于48 h。

7.权利要求1-3任一所述的基因工程菌在制备麦角硫因、含有麦角硫因的产品及麦角硫因衍生物中的应用。