[发明专利]一种通过硅胶柱吸附洗脱快速纯化蛋白的方法

权利要求书

1.一种通过硅胶柱吸附洗脱快速纯化蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、目标蛋白的获取：取用5-6％琼脂糖凝胶进行分离蛋白处理，分离完成后，进行染色处理，并切取所需的目标蛋白；

S2、蛋白结合缓冲液的添加：向步骤S1中染色后的目标蛋白中加入蛋白结合缓冲液，混合处理，在70℃下进行水浴10min后，制备所需的溶胶液，备用；

S3、溶胶柱的制备：将步骤S2中水浴后的溶胶液转移到硅胶柱中，在转速为12000rpm下离心1min，得到所需的溶胶柱；

S4、漂洗液的添加：向步骤S3中制备得到的溶胶柱中加入漂洗液；

S5、蛋白洗脱液的添加：向步骤S4中制备得到的溶胶柱中加入100ul的蛋白洗脱液；

S6、检测回收效果：利用SDS-PAGE进行电泳分离操作以及检测蛋白回收效果。

2.根据权利要求1所述的一种通过硅胶柱吸附洗脱快速纯化蛋白的方法，其特征在于，所述步骤S1中切取的目标蛋白使用R-250或KCL染色进行染色处理。

3.根据权利要求1所述的一种通过硅胶柱吸附洗脱快速纯化蛋白的方法，其特征在于，所述步骤S2中蛋白结合缓冲液为NaI+NaCl+β巯基乙醇的混合液或NaI、DEAB和Tris-HCl的结合液。

4.根据权利要求3所述的一种通过硅胶柱吸附洗脱快速纯化蛋白的方法，其特征在于，所述DEAB为一种核酸结合缓冲液。

5.根据权利要求3所述的一种通过硅胶柱吸附洗脱快速纯化蛋白的方法，其特征在于，所述NaI溶液的浓度≥5M、NaCl溶液的浓度≥1M以及β-巯基乙醇的浓度为1％。

6.根据权利要求1所述的一种通过硅胶柱吸附洗脱快速纯化蛋白的方法，其特征在于，所述步骤S4中的漂洗液为水、70％乙醇溶液、无水乙醇或甲醇中的一种，优选为无水乙醇，且添加无水乙醇的含量为700ul。

7.根据权利要求1所述的一种通过硅胶柱吸附洗脱快速纯化蛋白的方法，其特征在于，所述步骤S5中的蛋白洗脱液为水Tris-Cl缓冲液、低浓度的SDS溶液、裂解液或高浓度的尿素溶液中的一种，优选低浓度的SDS溶液或高浓度的尿素溶液。

8.根据权利要求7所述的一种通过硅胶柱吸附洗脱快速纯化蛋白的方法，其特征在于，所述低浓度的SDS溶液的浓度为0.2％。