[发明专利]一种通过硅胶柱吸附洗脱快速纯化蛋白的方法

说明书

本发明公开了一种通过硅胶柱吸附洗脱快速纯化蛋白的方法，涉及生物技术领域。包括以下步骤：S1、目标蛋白的获取；S2、蛋白结合缓冲液的添加；S3、溶胶柱的制备；S4、漂洗液的添加；S5、蛋白洗脱液的添加；S6、检测回收效果。本发明利用硅胶柱在一定的缓冲体系中吸附蛋白的原理进行目标蛋白的纯化，蛋白样品常常会含有SDS等表面活性剂，使用NaI+NaCl+β巯基乙醇作为蛋白结合缓冲液，可以解除表面活性剂对硅胶吸附蛋白的抑制，选择无水乙醇作为蛋白漂洗液，可以极大的降低漂洗造成的蛋白损失，使用低浓度SDS溶液或高浓度尿素等蛋白洗脱剂作为洗脱缓冲液可以将蛋白从硅胶柱上有效洗脱，操作步骤仅需30‑40分钟。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体为一种通过硅胶柱吸附洗脱快速纯化蛋白的方法。

背景技术

硅胶因其优良的机械强度和表面易改性等特征，已成为应用最广泛的色谱柱填料，硅胶柱具有柱效高、选择性好及分析速度快等特点，因而被广泛用于分离极性小分子，硅胶柱商品化程度较高，普遍用于核酸的纯化回收，核酸是一类生物聚合物，是所有已知生命形式必不可少的组成物质，是所有生物分子中最重要的物质，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内。

现有技术中的硅胶柱吸附洗脱快速纯化蛋白的方法在操作的过程中，不便于对目标蛋白进行纯化操作以及使得缓冲液对吸附蛋白进行抑制，使得在漂洗的过程中易造成蛋白的损失，从而不能有效将蛋白从硅胶柱上洗脱，降低了操作效果以及适用范围，为此，我们提出了一种通过硅胶柱吸附洗脱快速纯化蛋白的方法来解决上述问题。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种通过硅胶柱吸附洗脱快速纯化蛋白的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种通过硅胶柱吸附洗脱快速纯化蛋白的方法，包括以下步骤：

S1、目标蛋白的获取：取用5-6％琼脂糖凝胶进行分离蛋白处理，分离完成后，进行染色处理，并切取所需的目标蛋白；

S2、蛋白结合缓冲液的添加：向步骤S1中染色后的目标蛋白中加入蛋白结合缓冲液，混合处理，在70℃下进行水浴10min后，制备所需的溶胶液，备用；

S3、溶胶柱的制备：将步骤S2中水浴后的溶胶液转入硅胶柱中，在转速为12000rpm下离心1min，得到所需的溶胶柱；

S4、漂洗液的添加：向步骤S3中制备得到的溶胶柱中加入漂洗液；

S5、蛋白洗脱液的添加：向步骤S3中制备得到的溶胶柱中加入100ul的蛋白洗脱液；

S6、检测回收效果：利用SDS-PAGE进行电泳分离操作以及检测蛋白回收效果。

进一步优化本技术方案，所述步骤S1中切取的目标蛋白使用R-250或 KCL染色进行染色处理。

进一步优化本技术方案，所述步骤S2中蛋白结合缓冲液为NaI+NaCl+β巯基乙醇的混合液或NaI、DEAB和Tris-HCl的结合液。

进一步优化本技术方案，所述DEAB为一种核酸结合缓冲液。

进一步优化本技术方案，所述NaI溶液的浓度≥5M、NaCl溶液的浓度≥1 M以及β-巯基乙醇的浓度为1％。

进一步优化本技术方案，所述步骤S4中的漂洗液为水、70％乙醇溶液、无水乙醇或甲醇中的一种，优选为无水乙醇，且添加无水乙醇的含量为 700ul。

进一步优化本技术方案，所述步骤S5中的蛋白洗脱液为水Tris-Cl缓冲液、低浓度的SDS溶液、裂解液或高浓度的尿素溶液中的一种，优选低浓度的SDS溶液或高浓度的尿素溶液。

进一步优化本技术方案，所述低浓度的SDS溶液的浓度为0.2％。