[发明专利]靶向CLD18A2的T淋巴细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及靶向CLD18A2的T淋巴细胞及其制备方法和应用。本发明人首次从诸多肿瘤相关基因中成功地找到了一种适用于研制CAR T细胞的靶基因CLD18A2，并成功制备了靶向CLD18A2的CAR T细胞，从而为胰腺癌，胃癌等肿瘤提供一种全新的治疗手段。

本申请是申请号201410341504.X，申请日为2014年7月17日，发明名称为靶向CLD18A2的T淋巴细胞及其制备方法和应用案件的分案申请。

技术领域

本发明属于肿瘤细胞治疗领域，更具体地，本发明涉及靶向CLD18A2的T淋巴细胞及其制备方法和应用。

背景技术

T淋巴细胞在肿瘤免疫应答中的作用日益受到重视。基于T淋巴细胞的过继性免疫治疗在部分肿瘤中取得了一定的效果，并且该种免疫治疗方法可以克服抗体治疗的上述缺陷，但在大多数肿瘤的疗效仍不能令人满意[Grupp SA，et al.Adoptive cellulartherapy.Curr Top Microbiol Immunol.,2011；344:149-72.]。近年来，根据CTL对靶细胞的识别特异性依赖于T淋巴细胞受体(T Cell Receptor，TCR)的发现，将针对肿瘤细胞相关抗原的抗体的scFv与T淋巴细胞受体的CD3δ或FcεRIγ等胞内信号激活基序融合成嵌合抗原受体(Chimeric antigen receptor，CAR)，并将其通过如慢病毒感染等方式基因修饰在T淋巴细胞表面。这种CAR T淋巴细胞能够以主要组织相容性复合物(MajorHistocompatibility Complex，MHC)非限制性方式选择性地将T淋巴细胞定向到肿瘤细胞并特异性地杀伤肿瘤。CAR T淋巴细胞是肿瘤免疫治疗领域的一个新的免疫治疗策略[Schmitz M，et al.Chimeric antigen receptor-engineered T cells forimmunotherapy of Cancer.J Biomed Biotechnol，2010，doi:10.1155/2010/956304.]。

嵌合抗原受体包括胞外结合区，跨膜区和胞内信号区。通常胞外区包含能够识别肿瘤相关抗原的scFv，跨膜区采用CD8，CD28等分子的跨膜区，胞内信号区采用免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)CD3δ或FcεRIγ及共刺激信号分子CD28、CD27、CD137、CD134等的胞内信号区。

胞内信号区仅包含ITAM的为第一代CAR T淋巴细胞，其中嵌合抗原受体各部分按如下形式连接：scFv-TM-ITAM。该种CAR T可以激发抗肿瘤的细胞毒性效应，但是细胞因子分泌比较少，并且在体内不能激发持久的抗肿瘤效应[Zhang T.et al.Chimeric NKG2D-modified T cells inhibit systemic T-cell lymphoma growth in a mannerinvolving multiple cytokines and cytotoxic pathways，Can Res 2007，67(22):11029-11036.]。

随后发展的第二代CAR T淋巴细胞加入了CD28或CD137(又名4-1BB)的胞内信号区，其中嵌合抗原受体各部分按如下形式连接：scFv-TM-CD28-ITAM或scFv-TM-/CD137-ITAM。胞内信号区发生的B7/CD28或4-1BBL/CD137共刺激作用引起T淋巴细胞的持续增殖，并能够提高T淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ等细胞因子的水平，同时提高CAR T在体内的存活周期和抗肿瘤效果[Dotti G.et al.CD28 costimulation improves expansion andpersistence of chimeric antigen receptor modified T cells in lymphomapatients.J Clin Invest,2011,121(5):1822-1826.]。