[发明专利]一种热休克蛋白在制备抗胶质瘤药物中的应用及制备方法

权利要求书

1.一种用于靶向抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭、促进胶质瘤细胞凋亡、缓解和改善胶质瘤恶化、治疗胶质瘤的热休克蛋白22(Hsp22)或所述Hsp22的衍生物，其特征在于，所述热休克蛋白22的氨基酸序列为：a.如序列表SEQ ID No.1所示，或者，b.如将序列表SEQID No.1所示的氨基酸序列中的两个或两个以上的氨基酸替换为侧链可相连的非天然氨基酸所示，或c.在a.中的氨基酸序列经过替换、缺失或添加一个或几个氨基酸后形成的仍然具有靶向抑制胶质瘤细胞活性的多肽。

2.如权利要求1所述的Hsp22或所述Hsp22的衍生物，其特征在于，所述的衍生物为所述多肽与细胞穿膜肽接连所形成的嵌合肽，所述侧链可相连的非天然氨基酸为S-戊烯丙氨酸、R-戊烯丙氨酸或者R-辛烯丙氨酸。

3.权利要求2所述的Hsp22或所述Hsp22的衍生物，其特征在于，所述替换的氨基酸的数目为两个且所述替换的氨基酸的分别为序列表SEQ ID No.1所示的氨基酸序列的第i位和第i+3位的氨基酸、第i位和第i+4位的氨基酸，或者，第i位和第i+7位的氨基酸；其中，i为整数，且1≤i≤11。

4.一种抗胶质瘤的药物组合物，其特征是，含有如权利要求1～3任一项所述的Hsp22或所述Hsp22的衍生物，还包括一种或多种药用载体。

5.如权利要求1～3任一项所述的热休克蛋白(Hsp22)或所述Hsp22的衍生物、权利要求4或5所述的药物组合物在制备靶向抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭、促进胶质瘤细胞凋亡、缓解和改善胶质瘤恶化、治疗胶质瘤的药物中的应用，所述胶质瘤包括星形胶质细胞瘤、少突胶质细胞瘤、少突-星形胶质细胞混合瘤，所述胶质瘤的组织形态包括核异质型、有丝分裂型、微血管富集型以及坏死型。

6.权利要求1～3任一项所述的热休克蛋白22(Hsp22)的剂型制备方法，其特征在于，所述剂型为蛋白冻干剂，所述制备方法包括基因工程方法和化学合成方法。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法为基因工程方法，包括步骤：

(1)合成hsp22蛋白的基因序列，插入空白载体到构建表达载体；

(2)将(1)所得表达载体导入宿主细胞，将导入Hsp22蛋白的基因序列的重组细胞涂布平板培养；

(3)挑单菌落抗性液体诱导培养；

(4)离心收集含目标蛋白的培养物，破碎细胞；再次离心分别收集沉淀和上清；

(5)将离心后的上清过柱层析柱子纯化；

(6)分步收集不同组分并电泳检测后含目的蛋白的组分混合在一起；

(7)各组分去除盐分及杂蛋白，冻干，得粉末，保存。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述热休克蛋白Hsp22为按常规药剂学制备成用于注射的蛋白冻干剂，所述蛋白冻干剂注射液的配制浓度为15～26mg/ML，所述蛋白冻干剂注射老鼠的浓度为3～5.5mg/kg,配制所述蛋白冻干剂注射液的溶剂包括水，异丙醇，乙醇，甲醇，二甲亚砜，乙酸乙酯，乙酸和氨基乙醇。

9.权利要求1所述的靶向抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭、促进胶质瘤细胞凋亡、缓解和改善胶质瘤恶化、治疗胶质瘤的热休克蛋白22(Hsp22)的氨基酸序列的编码核苷酸序列，其特征在于，所述编码核苷酸序列如序列表SEQ ID No.2所示。

10.可产生权利要求1所述的靶向抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭、促进胶质瘤细胞凋亡、缓解和改善胶质瘤恶化、治疗胶质瘤的热休克蛋白22(Hsp22)的重组细胞，所述重组细胞包括原核生物细胞、真核生物细胞、哺乳动物细胞和植物细胞。