[发明专利]一种重组新城疫病毒rNDV-VEGF-Trap、其基因组、制备方法及其用途

权利要求书

1.一种重组的新城疫病毒基因组，其中，所述基因组包括VEGF-Trap的编码基因，所述VEGF-Trap的编码基因位于新城疫病毒基因组的P基因与M基因之间。

2.如权利要求1所述的重组的新城疫病毒基因组，其中，所述VEGF-Trap的编码基因处于DNA或RNA的形式；

优选地，所述VEGF-Trap的编码基因具有如SEQ ID NO.1所示的序列或与其具有至少80％同一性的序列。

3.如权利要求1或2所述的重组的新城疫病毒基因组，其中，所述重组的新城疫病毒基因组的序列以SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.5示出。

4.一种重组新城疫病毒，其中，所述病毒包含权利要求1-3中任一项所述的重组的新城疫病毒基因组。

5.如权利要求4所述的重组新城疫病毒，其中，所述新城疫病毒的出发毒株选自：弱毒株LaSota、Hitchner B1、V4，中毒株Mukteswar、Anhinga，强毒株F48E9、JS/7/05/Ch、Italien、Herts/33、NDV-BJ；以及基于所述出发毒株以基因工程手段构建的任意的嵌合毒株。

6.一种编码权利要求1-3中任一项所述的重组的新城疫病毒基因组的DNA分子。

7.一种药物组合物，其中，所述药物组合物包含权利要求1-3中任一项所述的重组的新城疫病毒基因组、权利要求4或5所述的重组新城疫病毒和/或权利要求6所述的DNA分子；

优选地，所述药物组合物进一步包含药学上可接受的辅料；

优选地，所述药学上可接受的药用辅料选自溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、抗氧剂、渗透促进剂、pH值调节剂、表面活性剂或稀释剂。

8.一种制备权利要求4或5所述的重组新城疫病毒的方法，其中，所述方法包括：

(1)将含有VEGF-Trap的编码基因的DNA序列的克隆载体与NDV病毒载体分别进行酶切，并将酶切得到的所述VEGF-Trap的编码基因的DNA序列与所述NDV病毒载体进行连接，得到重组新城疫病毒质粒；

(2)将所述重组新城疫病毒质粒转染至细胞中并对经转染的细胞进行培养，获得所述重组新城疫病毒。

9.如权利要求8所述的方法，其中，采用选自如下的载体构建所述克隆载体：PUC57载体、pMD18-T载体、pMD19-T载体、pBlueScript SK(+/-)载体、pBluescript II KS(+/-)；

优选地，所述NDV病毒载体为选自如下的NDV病毒的基因组的全长cDNA序列：弱毒株LaSota、Hitchner B1、V4，中毒株Mukteswar、Anhinga，强毒株F48E9、JS/7/05/Ch、Italien、Herts/33、NDV-BJ；

优选地，所述NDV病毒载体为pBluescript II KS(+/-)-NDV(pBrNDV)、pCI-neo-NDV、pOLTV5-NDV载体；

优选地，将所述重组新城疫病毒质粒与选自如下的辅助质粒共转染至所述细胞中：pTM-NP、pTM-P和pTM-L；pCI-neo-NP、pCI-neo-P和pCI-neo-L；或者pBluescript II KS(+/-)-NP、pBluescript II KS(+/-)-P和pBluescript II KS(+/-)-L；

优选地，所述细胞选自BHK-21细胞、BSR-T7/5细胞、VERO细胞、DF-1细胞、293细胞或MDCK细胞。

10.权利要求1-3中任一项所述的重组的新城疫病毒基因组、权利要求4或5所述的重组新城疫病毒、权利要求6所述的DNA分子和/或权利要求7所述的药物组合物在制备用于治疗或改善癌症的药物中的用途；

优选地，所述癌症选自：结肠癌、肝癌、肺癌、胃癌、直肠癌、白血病、淋巴瘤、卵巢癌、乳腺癌、子宫内膜癌、膀胱癌、尿路上皮癌、支气管癌、骨癌、前列腺癌、胰腺癌、胆囊癌、胆管癌、食道癌、肾细胞癌、甲状腺癌、头颈癌、睾丸癌、内分泌腺癌、肾上腺癌、脑下垂体癌、皮肤癌、软组织癌、血管癌、脑癌、神经癌、眼癌、脑膜癌、口咽癌、下咽部癌、宫颈癌、肌肉瘤、子宫癌、成胶质细胞瘤、成神经管细胞瘤、神经母细胞瘤、肾癌、星形细胞瘤、胶质瘤、脑膜瘤、胃泌素瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、急性髓系白血病、骨髓增生异常综合征或肉瘤。