[发明专利]一种重组新城疫病毒rNDV-VEGF-Trap、其基因组、制备方法及其用途

说明书

本申请公开了一种重组的新城疫病毒基因组、包含该基因组的重组新城疫病毒rNDV‑VEGF‑Trap及其制备方法、编码上述的重组的新城疫病毒基因组的DNA分子以及它们在制备用于治疗癌症的药物中的用途。本申请所述的重组新城疫病毒涉及将VEGF‑Trap的编码基因插入其基因组中，由此得到的重组新城疫病毒以较强的复制能力进行复制从而杀死宿主癌细胞，同时对非癌细胞具有可靠的安全性，并且表现出提高的抗肿瘤作用和溶瘤效率。

技术领域

本申请属于癌症治疗用溶瘤病毒领域，具体而言，涉及一种重组的新城疫病毒基因组、包含该基因组的重组新城疫病毒及其制备方法、编码上述的重组的新城疫病毒基因组的DNA分子以及它们的用途。

背景技术

癌症是由于机体细胞失去正常调控、过度增殖而引起的疾病，目前已成为影响健康的第一杀手。我国是癌症尤其是肺癌、胃癌、肝癌及直肠癌高发区。据统计，仅2016年一年全国新增各类癌症患者480万例，230万病人死于各种癌症。随着技术进步，各种新的治疗手段尤其是生物药物治疗不断投入临床使用。但药物的安全性、有效性及病人的生活质量等方面的需求远未得以满足。发展新药或治疗手段势在必行。

1991年，Martuza等人在《Science》杂志发表文章，证明转基因单纯疱疹病毒在恶性胶质瘤治疗中有一定的效果。至此以后，发展溶瘤病毒治疗癌症就日益受到关注。溶瘤病毒治疗癌症的原理是通过对自然界存在的一些致病力较弱的病毒进行基因改造，让其选择性地感染肿瘤细胞、在细胞内大量复制并最终摧毁肿瘤细胞。同时它还能激发免疫反应，吸引免疫细胞来继续杀死残余癌细胞或通过免疫反应杀灭已迁移的癌细胞。近几十年来，溶瘤病毒相关研究取得了巨大进展。人们先后用新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)、1型单纯疱疹病毒(HSV-1)、呼肠孤病毒(reovirus)、溶瘤腺病毒(oncolyticadenovirus)来开发溶瘤病毒，但临床表现都远低于预期。例如，2005年CFDA批准了溶瘤腺病毒产品H101上市，然而其治疗效果并不理想。

NDV是一种具有负义单链RNA基因组的禽副粘病毒，它一直是癌症治疗的有希望的方法。但NDV作为单一药物治疗的效果有限，一方面，人体抗病毒免疫反应能够清除病毒，另一方面，人体能够产生中和抗体来抵抗病毒发挥作用。为了提高NDV在癌症中的治疗效率，这些病毒随后用来传递具有抗肿瘤活性的基因，以进一步增强活性。这样的基因包括编码细胞因子或其受体、免疫检查点分子、肿瘤抑制蛋白或免疫刺激蛋白的基因。

此前，本领域已对在其基因组中整合有编码细胞因子或其受体的基因的重组新城疫病毒进行了众多研究，但仍未取得临床上有益的进展。例如，Pascal Buijs等(Recombinant Immunomodulating Lentogenic or Mesogenic Oncolytic NewcastleDisease Virus for Treatment ofPancreatic Adenocarcinoma，Viruses 2015，7，2980-2998)研究了表达干扰素或干扰素拮抗蛋白的重组新城疫病毒。

研究表明血管生成是肿瘤治疗的重要靶标。血管生成是从现有的内皮细胞中生成新的血管，进而向各种器官提供充足氧气和营养的过程，其对于肿瘤的生长和转移至关重要，抗血管生成疗法是癌症治疗的重要方法之一。在肿瘤新生血管形成过程中，支持肿瘤生长的促血管生成因子主要有：血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血小板源性生长因子(PDGF)、表皮生长因子(EGF)、血管生成蛋白(angiogenin)和转化生长因子-β(TGF-β)等，这些因子通过与相应的受体结合，激活下游信号通路，从而调控肿瘤新血管的生成。