[发明专利]一种降钙素原的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种降钙素原的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，包括：磁微粒试剂、PCT校准品、PCT质控品和PCT抗试剂。

2.根据权利要求1所述的一种降钙素原的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述磁微粒试剂为连接有羊抗FITC抗体的磁微粒溶液，制备方法为：

1)将羧基磁珠溶液在磁微粒缓冲液的作用下进行分散处理，得到分散的羧基磁珠溶液；

2)将所述分散的羧基磁珠溶液和羊抗FITC抗体进行连接反应，得到连接产物；

3)将所述连接产物置于磁场中，用磁微粒缓冲液冲洗，制得连接有羊抗FITC抗体的磁微粒溶液。

3.根据权利要求2所述的一种降钙素原的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于：步骤1)中所述分散处理：将羧基磁珠浓缩液置于磁场内15～20min，待羧基磁珠全部沉降后除去上层清液，加入磁微粒缓冲液振荡后，置于磁场中15～20min后，除去上层清液；

所述振荡时间均为20～30min；

所述羧基磁珠和磁微粒缓冲液的体积比为1:(2～5)；

所述分散处理为3次；

步骤2)中，所述分散的羧基磁珠溶液和羊抗FITC抗体的质量比为100:5～100：1；

所述分散的羧基磁珠溶液的浓度为10～50mg/mL；

所述连接反应的温度为2～8℃，所述连接反应的时间为16～20h；

步骤3)中，置于磁场的时间为13～17min；

所述冲洗的次数为3次；

所述连接有羊抗FITC抗体的磁微粒溶液的浓度为10mg/mL。

4.根据权利要求1所述的一种降钙素原的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于：所述PCT校准品、所述PCT质控品均为含有PCT抗原、质量百分含量0.5％BSA、质量百分含量0.05％prolin300的Tris缓冲液；其中，所述PCT质控品抗原的浓度分别为0.8ng/mL、33.0ng/mL；所述PCT校准品抗原的浓度分别为2.8ng/mL和33.0ng/mL。

5.根据权利要求1所述的一种降钙素原的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述PCT抗试剂包括：FITC标记的抗PCT抗体1和AP标记的抗PCT抗体2，浓度均为0.5±0.05μg/mL。

6.根据权利要求5所述的一种降钙素原的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述FITC标记的抗PCT抗体1的制备方法：

1)用0.15M碳酸氢钠缓冲液将FITC配成浓度为1.0～5.0mg/mL的FITC溶液；

2)将小鼠单克隆抗PCT抗体1和FITC溶液按照质量比为1：(1～1.5)混合，进行链接反应，得到PCT抗体与FITC的链接产物；

3)将所述链接产物用pH为8～9的碳酸盐缓冲液分离纯化，得到FITC标记的抗PCT抗体。

7.根据权利要求5所述的一种降钙素原的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述AP标记的抗PCT抗体2的制备方法：

1)用TRIS缓冲液将AP配成浓度为1.0～5.0mg/mL的AP溶液；

2)将小鼠单克隆抗PCT抗体2和AP溶液分别进行活化，将活化后的AP溶液和小鼠单克隆抗PCT抗体按摩尔比为1：(1～3)混匀，在1M氯化镁溶液作用下，进行偶联反应，得到偶联产物；

3)将所述偶联产物加入到分离纯化仪内，使用pH为7.5的Tris缓冲液作为流动相，流动速度为1ml/min；收集15～35min的分离产物，得到AP标记的抗PCT抗体。

8.一种非诊断治疗目的检测降钙素原的方法，其特征在于，包括：将血清样本、FITC标记的抗PCT抗体1、AP标记的抗PCT抗体2混合后孵育，加入磁微粒试剂，再次孵育，待磁微粒试剂沉降后，除去上清液，清洗两次，加入底物溶液振荡混匀，检测相对发光强度。