[发明专利]一种通过发酵法用黄芩苷制备黄芩素的方法

权利要求书

1.一种通过发酵法用黄芩苷制备黄芩素的方法，其特征在于，包括：通过马克斯克鲁维酵母菌和扁平云假丝酵母(Candida humilis)YS023A菌共同发酵法用黄芩苷制备黄芩素；所述马克斯克鲁维酵母菌的保藏编号为CGMCC No.13907；所述扁平云假丝酵母(Candidahumilis)YS023A菌的保藏编号为CGMCC No.17257；

所述方法包括如下步骤：

S1分别活化：

将所述马克斯克鲁维酵母菌和所述扁平云假丝酵母(Candida humilis)YS023A菌分别在基础培养基上进行活化；

S2分别进行种子培养：

从活化的所述马克斯克鲁维酵母菌中蘸取菌种，接种到基础培养基中，进行恒温振荡培养，得到第一种子液；

从活化的所述扁平云假丝酵母(Candida humilis)YS023A菌中蘸取菌种，接种到基础培养基中，进行恒温振荡培养，得到第二种子液；

S3发酵培养：

将接种量为5%~10%的马克斯克鲁维酵母菌和接种量为1%~5%的扁平云假丝酵母(Candida humilis)YS023A菌接种到发酵培养基中，进行恒温振荡培养，得到发酵液；

S4黄芩素分离纯化：

对所述发酵液进行过滤，回收沉淀物，将所述沉淀物用乙酸乙酯溶解，过滤，对滤液进行减压浓缩，乙醇重结晶，得到黄芩素。

2.根据权利要求1所述的通过发酵法用黄芩苷制备黄芩素的方法，其特征在于，所述基础培养基终浓度组成为：

牛肉浸粉8~12g/L，蛋白胨10~15g/L，酵母浸粉4~7g/L，葡萄糖20~30g/L，磷酸氢二钾1~5g/L，柠檬酸氢二铵1~5g/L，乙酸钠1~5g/L，硫酸镁0.1~0.4g/L，硫酸锰0.03~0.07g/L，溶剂为水，pH为4~6。

3.根据权利要求1所述的通过发酵法用黄芩苷制备黄芩素的方法，其特征在于，所述基础培养基体积为100mL，终浓度组成为：

牛肉浸粉10g/L，蛋白胨13g/L，酵母浸粉5g/L，葡萄糖25g/L，磷酸氢二钾2g/L，柠檬酸氢二铵2g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.3g/L，硫酸锰0.05g/L，溶剂为水，pH为5.4。

4.根据权利要求1所述的通过发酵法用黄芩苷制备黄芩素的方法，其特征在于，所述发酵培养基终浓度组成为：

黄芩苷8~12g/L，水分含量为60%~90%的大豆渣5~10g/L，牛肉浸粉10~20g/L，蛋白胨15~25g/L，酵母浸粉5~10g/L，葡萄糖30~40g/L，磷酸氢二钾3~6g/L，柠檬酸氢二铵3~6g/L，乙酸钠8~12g/L，硫酸镁0.3~0.6g/L，硫酸锰0.05~0.2g/L，溶剂为水，pH为4~6。

5.根据权利要求1所述的通过发酵法用黄芩苷制备黄芩素的方法，其特征在于，所述发酵培养基体积为1L，终浓度组成为：

黄芩苷10g/L，水分含量为80%的大豆渣8g/L，牛肉浸粉15g/L，蛋白胨20g/L，酵母浸粉7g/L，葡萄糖38g/L，磷酸氢二钾5g/L，柠檬酸氢二铵5g/L，乙酸钠10g/L，硫酸镁0.4g/L，硫酸锰0.1g/L，溶剂为水，pH为5.8。

6.根据权利要求1所述的通过发酵法用黄芩苷制备黄芩素的方法，其特征在于，在步骤S1中，所述活化的条件为于30℃~40℃生化培养箱中培养8~15h。

7.根据权利要求1所述的通过发酵法用黄芩苷制备黄芩素的方法，其特征在于，在步骤S2中，所述恒温振荡培养的条件为30℃~40℃、120r/min恒温振荡培养15h~30h。

8.根据权利要求1所述的通过发酵法用黄芩苷制备黄芩素的方法，其特征在于，在步骤S2中，所述第一种子液中干菌体浓度和所述第二种子液中干菌体浓度相同，均为6~10g/L。