[发明专利]原位检测凋亡细胞的方法有效
申请号: | 202110398547.1 | 申请日: | 2021-04-12 |
公开(公告)号: | CN113088563B | 公开(公告)日: | 2023-03-31 |
发明(设计)人: | 向正华;纪瑞华;赵正卿 | 申请(专利权)人: | 中国人民解放军海军军医大学;上海长征医院 |
主分类号: | C12Q1/682 | 分类号: | C12Q1/682 |
代理公司: | 上海翰信知识产权代理事务所(普通合伙) 31270 | 代理人: | 张维东;董佳 |
地址: | 200433 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 原位 检测 细胞 方法 | ||
1.一种原位检测凋亡细胞的方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1,将发卡DNA用标记物进行标记,所述发卡DNA为成对的,其中,发卡DNA1的序列为:AATATGGTGAGAGTTGGACACATTTCCAACTCTCAC,发卡DNA2的序列为:TCCAACTCTCACCATATTGTGAGAGTTGGAAATGTG,
对组织切片进行如下处理:
步骤a,将组织切片依次用PBS缓冲液、蒸馏水进行冲洗,用PBS缓冲液冲洗时,冲洗2次,每次冲洗三分钟,组织切片用蒸馏水冲洗时,冲洗3分钟,
步骤b,将步骤a中冲洗的组织切片用柠檬酸抗原修复液进行修复处理,修复处理的方法为:组织切片加入柠檬酸抗原修复液后,在95℃的温度下修复10分钟,
步骤c,将步骤b中修复处理的组织切片用蒸馏水进行冲洗,冲洗3分钟,
步骤d,将步骤c中冲洗后的组织切片用SSC缓冲液进行处理,处理的方法为:组织切片加入SSC缓冲液处理,浸泡三分钟;
步骤2,将标记的发卡DNA与需要检测的组织切片进行杂交链反应,反应时在室温下反应1个小时,杂交链反应完成后,对杂交链反应完成后的组织切片进行冲洗,冲洗时,用PBS缓冲液冲洗2次,每次冲洗3分钟,然后对组织切片进行DAPI染核处理;
步骤3,用显微镜检测步骤2中DAPI染核处理后的组织切片,用显微镜观察组织切片时,将组织切片用甘油封片,然后用显微镜进行观察。
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