[发明专利]一种斑玉蕈液体菌种的制备方法

权利要求书

1.一种斑玉蕈液体菌种的制备方法，其特征在于：具体的方法步骤如下：

培养基的前期准备：包括PDA培养基制备，种子培养基制备，发酵培养基；

液体菌种生产过程：

（1）从4℃冰箱中取出斑玉蕈试管种，利用接种钩，取直径为0.5～0.6 厘米菌块置于PDA平板培养基中，23～24℃培养10～12天；

（2）利用打孔器，从PDA培养基的菌落边缘处取6～8块、直径为0.8～1.0 厘米菌块接种于600毫升种子培养基中，23～24℃摇床震荡培养6～7天，转速140～160转/分钟；培养期间，观察种子培养液有浑浊、大量气泡、菌液发白或有漂浮物现象发生，表明种子液受到杂菌污染，污染的种子液及时灭菌处理；

（3）取未污染的种子液，放置于磁力搅拌器上通电搅拌16～24小时，此为种子液；此操作可以将成团的菌丝球打碎，一是接种发酵罐时，不会堵塞接种口，提高接种效率；二是接种发酵培养基后，菌丝体分散均匀，易萌发；

（4）将抽滤嘴插入发酵罐的接种口，将种子液倒入发酵罐中，接种量1%；调节培养温度23～24℃，通入净化空气进行培养，培养时间6～7天，获得液体菌种；

PDA培养基制作过程： 称取200克土豆并切成薄片，然后加入1000毫升水，煮沸20分钟；待冷却后取纱布过滤，滤液中加入20克葡萄糖和15克琼脂，再次加热至完全融化，补足水至1000毫升；将PDA培养基分装至500毫升三角瓶中，每瓶250-300毫升，121℃灭菌30分钟；待培养基冷却至50～60℃时，无菌环境下倒平板，每个平板30～35毫升；

种子培养基制作过程：称取24克新鲜、无霉变的麸皮，加入500毫升水，煮沸20分钟；待冷却后取纱布过滤，滤液中依次加入9.6克土豆淀粉，1.2克玉米淀粉，24克葡萄糖，6克蛋白胨，2.4克磷酸二氢钾，以及1.2克硫酸镁，补足水至1200毫升，最后加入0.1毫升消泡剂；加热搅拌均匀后，将种子培养基分装至带抽滤嘴的1000毫升锥形瓶中，每瓶600毫升，121℃灭菌30分钟；

发酵培养基制作过程：利用1000 升气动式发酵罐，加入500升水，通蒸汽加热至60～80℃；取30～50升水，加入8～12千克白糖，加热至溶解备用，得配料A；取50～100升水，依次加入豆粕粉，酵母膏，磷酸二氢钾，硫酸镁，柠檬酸以及消泡剂，搅拌均匀，得配料B；将配料A和配料B依次注入发酵罐，通冷空气2分钟至溶解均匀，然后进行高压蒸汽灭菌，在0.14～0.15兆帕压力下维持60～70分钟，发酵培养基的配方为：豆粕粉2.4～2.8千克，酵母膏1.2～1.6千克，磷酸二氢钾0.4～0.6千克，硫酸镁0.2～0.3千克，柠檬酸0.1～0.2千克，白糖8～12千克，消泡剂60毫升，水600～700 L，pH 6.0～6.5。

2.根据权利要求1所述的一种斑玉蕈液体菌种的制备方法，其特征在于：发酵培养基的配方A：豆粕粉2.4千克，酵母膏1.6千克，磷酸二氢钾0.5千克，硫酸镁0.25千克，柠檬酸0.154千克，白糖12千克，消泡剂60毫升，水600～700 L，pH 6.0～6.5；

配方B：豆粕粉2.8千克，酵母膏1.2千克，磷酸二氢钾0.5千克，硫酸镁0.25千克，柠檬酸0.154千克，白糖8千克，消泡剂60毫升，水600～700 L，pH 6.0～6.5。