[发明专利]一种人羊膜间充质干细胞悬液的制备与应用

说明书

本发明公开了一种人羊膜间充质干细胞悬液，所述人羊膜间充质干细胞悬液是由人羊膜间充质干细胞混悬于PBS溶液中制得，悬液中的人羊膜间充质干细胞密度为5×10⁶个/ml，所述人羊膜间充质干细胞是由人羊膜组织经过分离与传代培养制得的，所述人羊膜组织是由正常足月剖腹产胎儿的胎盘脐带面钝性分离，经D‑Hank’s液充分冲洗后将羊膜剪碎为制得的。本发明以人羊膜为原材料，可明显提高移植心脏处的细胞数量，选择采取腹腔注射的方式给药，与原位注射相比降低了注射时重要脏器损伤的风险，更加安全可行。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体而言，涉及人羊膜间充质干细胞在心脏移植受体中的应用。

背景技术

心脏移植(hearttransplantation,HTx)是终末期心脏疾病的最佳治疗手段，但移植心脏在术后面临着诸多考验。在接入受者的循环系统后，移植心脏将不可避免的出现缺血再灌注损伤与排斥反应，限制着心脏移植的治疗效果。目前，心脏移植的排斥反应随着免疫抑制剂的发展得到了显著改善，但随之而来的终生服药、药物并发症与尚未拥有有效治疗方法的慢性排斥反应等问题的出现提示，当前的器官移植领域还需要更好的免疫抑制治疗方法。

近些年来，间充质干细胞的相关研究不断涌现。作为一种来源广泛，具备自我更新与多向分化能力的干细胞，间充质干细胞最初被应用于再生医学领域，希望可通过向受损部位归巢并分化的方式达到治疗效果。而随着研究的不断深入，越来越多的研究认为间充质干细胞的治疗效果主要源自于其抗炎、营养周边组织、促进血管生成等特性。此外，研究发现间充质干细胞不仅本身的免疫原性较低，适合异体移植，其还具备强大的免疫调节特性。研究表明，间充质干细胞的输注不仅可以抑制器官移植受体的排斥反应，延长移植器官的存活时长，还具备诱导特异性免疫耐受的潜能，在心脏移植领域拥有巨大的发展前景。

移植心脏的缺血再灌注损伤与排斥反应损伤之间可以相互促进，对心脏移植受体的短期存活率产生较大影响。而目前的研究结果显示，间充质干细胞对这两种损伤形式都有着不错的治疗效果。大量研究证实了间充质干细胞对缺血再灌注损伤的治疗作用。研究表明，间充质干细胞可通过归巢分化修复受损组织，旁分泌释放具有抗炎、抗凋亡、促进血管生成作用的相关因子与外泌体的方式减轻移植心脏的缺血再灌注损伤。排斥反应方面，间充质干细胞可通过旁分泌作用(释放多种细胞因子如：IDO/iNOs、TGF-β、PGE2、HGF、IL-10、TSH-6等)与细胞间直接接触的方式调节受体的免疫状态，具体可表现为抑制T、B与NK细胞的增殖与功能，诱导促炎性T细胞凋亡，抑制抗原呈递细胞的成熟，诱导巨噬细胞极化为M2型，诱导调节性T细胞的扩增等。有效的利用间充质干细胞的相关特性可为心脏移植等器官移植领域提供一种具备综合治疗效果的新型治疗手段。

间充质干细胞来源广泛，而人羊膜与其他来源的间充质干细胞(如骨髓间充质干细胞)相比具有特定优势。就来源而言，人羊膜属于医疗废弃物且资源丰富，无需有创性取材，且该组织中间充质干细胞丰度更高；就分离所得细胞而言，主流的骨髓间充质干细胞的治疗效果会受到供体年龄的影响，而人羊膜间充质干细胞则更为稳定。此外，人羊膜间充质干细胞还具备一些胚胎干细胞的表型特征(如表达SSEA-3，SSEA-4，TRA-1-81，TRA-1-60，SOX-2，FGF-4、Rex-1等)，提示其具有更高的分化潜能与更低的免疫原性。在未来的细胞制剂发展应用过程中，人羊膜间充质干细胞将成为重要的细胞制剂原材料。