[发明专利]一种带有DNA标签的磁珠制备方式

权利要求书

1.一种带有DNA标签的磁珠制备方式，其特征在于：具体包括以下步骤，

步骤1、将磁珠加入相同体积的活化剂中，室温条件下避光，震荡活化0.5～5h，磁分离，弃上清液；

步骤2、用保存缓冲液清洗活化后的磁珠数次，然后将活化后的磁珠拆分到若干试管中，得到若干试管的活化的磁珠悬浮液；

步骤3、在每个试管中加入一种DNA片段溶液，得到磁珠混合液；

步骤4、将步骤3中所得的磁珠混合物中加入缩合剂，在缩合剂的作用下发生羧氨反应脱水缩合进行连接，形成若干试管的混合溶液，反应结束后，使用保存缓冲液对每管磁珠都进行清洗，获得溶液A；

步骤5、将所有溶液A混合至一个试管内并混匀，然后重新拆分至若干试管，每个试管加入DNA片段溶液和DNA聚合酶，并进行DNA聚合反应，将反应后的溶液使用保存缓冲液清洗，获得磁珠混合液B；

步骤6、对磁珠悬浮液B进行高温解链，解链后充分冷却，再用保存缓冲液清洗数次，即可获得带有DNA标签的磁珠混合液C；

步骤7、将磁珠混合液C混合至一个试管内并混匀，然后重新拆分为若干管，每个试管加入DNA片段溶液和DNA聚合酶，并进行DNA聚合反应，反应后用保存缓冲液清洗对溶液清洗，获得磁珠混合液D；

步骤8、将磁珠混合液D进行高温解链，解链后充分冷却，再用保存缓冲液清洗数次，即可获得带有DNA标签的磁珠，最后将所有试管的磁珠合并至同一试管即可。

2.根据权利要求1所述的一种带有DNA标签的磁珠制备方式，其特征在于：所述步骤1中的活化剂为体积百分比浓度为50％～60％的1，4－丁二醇－双缩水甘油醚。

3.根据权利要求1所述的一种带有DNA标签的磁珠制备方式，其特征在于：所述步骤2、步骤4、步骤5、步骤7和步骤8中的保存缓冲液为pH值＝8.6、含体积百分比浓度0.01％硫柳汞钠和5％蛋白保护剂的1×PBS缓冲液。

4.根据权利要求1所述的一种带有DNA标签的磁珠制备方式，其特征在于：所述缩合剂为缩合剂DCC，DIC，EDC或EDCI中的一种。

5.根据权利要求1所述的一种带有DNA标签的磁珠制备方式，其特征在于：所述DNA聚合酶为Bst 2.0DNA聚合酶、Bst 2.0WarmStartTM DNA聚合酶、Bst DNA聚合酶、硫化叶菌DNA聚合酶IV、Taq DNA聚合酶、9°NTMm DNA聚合酶、Deep VentRTM(exo-)DNA聚合酶、DeepVentRTM DNA聚合酶、Taq DNA聚合酶、Q5TM高保真度DNA聚合酶、有酶切活性的Klenow酶、无酶切活性的Klenow酶、Thermina torT MγDNA聚合酶中的一种。

6.根据权利要求5所述的一种带有DNA标签的磁珠制备方式，其特征在于：所述步骤1-步骤8均在无菌环境下进行操作，步骤3-步骤5均在室温下进行。