[发明专利]一种带有DNA标签的磁珠制备方式

说明书

本发明提供一种带有DNA标签的磁珠制备方式，具体包括：将磁珠加入活化剂中，震荡活化，磁分离，弃上清液；用保存缓冲液清洗磁珠，得到活化的磁珠悬浮液；加入DNA片段溶液，得到磁珠混合液；加入缩合剂，形成混合溶液进行反应，反应结束后，使用保存缓冲液对每管磁珠都进行清洗，获得溶液A；加入DNA片段溶液和DNA聚合酶，获得磁珠混合液B；进行高温解链，解链后充分冷却，再用保存缓冲液清洗数次，即可获得带有DNA标签的磁珠混合液C；加入DNA片段溶液和DNA聚合酶，获得磁珠混合液D；将磁珠混合液D进行高温解链，即可获得带有DNA标签的磁珠。本带有DNA标签的磁珠可以在测序时可以大幅度提高序列质量。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体为一种带有DNA标签的磁珠制备方式。

背景技术

单细胞转录组测序(single-cell RNA-sequencing，scRNA-seq)是近几年兴起的新技术，能够从单个细胞水平获得全转录组表达谱、扩增后进行高通量测序，从而高效地检测单个细胞内的基因表达水平，在干细胞的发育与分化、肿瘤的诊断与治疗、靶向药物的设计等领域具有重要的应用价值。

单细胞转录组测序之所以可以同时对成百数千个细胞进行测序，是因为每个细胞都贴有不同的标签，为了区别每个细胞中的每条mRNA，每条mRNA同样被赋予一个唯一的分子标签。目前单细胞测序的微流控平台，主要是将单个细胞与带有分子标签的单个微珠或者磁珠置于一个微孔环境，细胞裂解后，不同的细胞可携带特异的细胞标签，经反转录同一个细胞的不同mRNA又被不同分子标签所标记。这种方法可追踪每个基因的细胞来源，而且可以对mRNA进行定量，显著提高了测序通量、降低测序成本并且减轻扩增偏好的影响。但是现有带有标签的磁珠在进行测序时，序列质量有待提高。

发明内容

本发明所解决的技术问题在于提供一种带有DNA标签的磁珠制备方式，以解决上述背景技术中的问题。

本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现一种带有DNA标签的磁珠制备方式，具体包括以下步骤：

步骤1、将磁珠加入相同体积的活化剂中，室温条件下避光，震荡活化0.5～5h，磁分离，弃上清液；

步骤2、用保存缓冲液清洗活化后的磁珠数次，然后将活化后的磁珠拆分到若干试管中，得到若干试管的活化的磁珠悬浮液；

步骤3、在每个试管中加入一种DNA片段溶液，得到磁珠混合液；

步骤4、将步骤3中所得的磁珠混合物中加入缩合剂，在缩合剂的作用下发生羧氨反应脱水缩合进行连接，形成若干试管的混合溶液，反应结束后，使用保存缓冲液对每管磁珠都进行清洗，获得溶液A；

步骤5、将所有溶液A混合至一个试管内并混匀，然后重新拆分至若干试管，每个试管加入DNA片段溶液和DNA聚合酶，并进行DNA聚合反应，将反应后的溶液使用保存缓冲液清洗，获得磁珠混合液B；

步骤6、对磁珠悬浮液B进行高温解链，解链后充分冷却，再用保存缓冲液清洗数次，即可获得带有DNA标签的磁珠混合液C；

步骤7、将磁珠混合液C混合至一个试管内并混匀，然后重新拆分为若干管，每个试管加入DNA片段溶液和DNA聚合酶，并进行DNA聚合反应，反应后用保存缓冲液清洗对溶液清洗，获得磁珠混合液D；

步骤8、将磁珠混合液D进行高温解链，解链后充分冷却，再用保存缓冲液清洗数次，即可获得带有DNA标签的磁珠，最后将所有试管的磁珠合并至同一试管即可。

优选地，所述步骤1中的活化剂为体积百分比浓度为50％～60％的1，4－丁二醇－双缩水甘油醚。

优选地，所述步骤2、步骤4、步骤5、步骤7和步骤8中的保存缓冲液为pH值＝8.6、含体积百分比浓度0.01％硫柳汞钠和5％蛋白保护剂的1×PBS缓冲液。