[发明专利]27位赖氨酸突变泛素分子增强树突状细胞交叉提呈的方法

权利要求书

1.增强树突状细胞交叉提呈的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）从小鼠骨髓中分离得到树突状细胞；

2）进行ubiquitin的siRNA干扰，树突状细胞在干扰ubiquitin后同时加入泛素化突变链K27R 10～30μM 及外源性抗原OVA 50～100μg/mL，作用4～6 h后，收集树突状细胞至离心管中，以PBS重悬树突状细胞并离心去除多余泛素化突变链K27R及外源性抗原OVA影响。

2.如权利要求1所述增强树突状细胞交叉提呈的方法，其特征在于在步骤1）中，所述从小鼠骨髓中分离得到树突状细胞具体方法为：首先脱臼处死小鼠，酒精消毒后，无菌分离股骨和胫骨，剔除多余肌肉组织，将骨髓冲出，直至骨头由红变灰白色，以无菌注射器底部研磨骨髓成单细胞悬液；离心弃上清后，加入红细胞裂解液裂解红细胞，待溶液由红变白后，加入等体积完全培养液终止；再次离心、弃上清，以培养液调整细胞浓度为1×10⁶个/mL；加入细胞因子GM-CSF和IL-4，使其终浓度为10 ng/mL和1 ng/mL；置于培养箱中培养；在第4天时，弃去上清中悬浮细胞，以 PBS 冲洗皿底，得到的皿底贴壁的细胞继续培养2～4天，即为从小鼠骨髓中分离得到树突状细胞。

3.如权利要求1所述增强树突状细胞交叉提呈的方法，其特征在于在步骤2）中，所述ubiquitin的siRNA干扰，具体步骤为：首先siRNA、transfection reagent、transfectionmedium置于常温避光待其恢复室温；其次配制ubiquitin siRNA稀释液后，以PBS清洗树突状细胞后，加入ubiquitin siRNA稀释液轻轻覆盖于细胞，作用5～7h；继而加入20% FBS的1640培养液，作用24h；最后换液，加入10 % FBS 的RMPI 1640培养基，继续培养48～72 h待用。