[发明专利]一种改进的基于CRISPR系统介导的核酸可视化检测技术及其应用

权利要求书

1.一种用于检测靶标核酸分子的荧光或裸眼可视化检测体系，其特征在于，所述检测体系包括：

(a)Cas12a蛋白(又称为Cpf1)，所述Cas12a蛋白是Cas12a或者具有与Cas12a的旁路单链DNA切割活性类似的Cas蛋白；

(b)crRNA，所述crRNA引导Cas12a蛋白特异性结合于靶标核酸分子；和

(c)核酸探针，所述核酸探针含有可检测的标记物，其中当所述核酸探针被Cas12a蛋白旁路切割后，产生可检测信号，其中，所述的核酸探针为ssDNA-reporter单链DNA报告分子，并且所述的ssDNA-reporter的5'端的碱基进行荧光基团修饰，所述荧光基团选自下组：ROX、Texas Red、VIC、JOE、HEX、TAMRA、TET、PET、Alexa flour 633(NHS)、Quasar 570、Quasar 670、Cy3、Cy5、Cy5.5、或其组合；并且，所述可检测信号在可见光、蓝光或紫外光下进行检测，在所述的检测体系中，在可见光下，ssDNA-reporter的浓度为2.5-30μM，较佳地10-30μM，更佳地10-20μM；在蓝光下，ssDNA-reporter的浓度为0.1-30μM，较佳地，0.3-30μM，更佳地，2.5-10μM；在紫外光下，ssDNA-reporter的浓度为0.05-30μM，较佳地，0.15-30μM，更佳地，0.15-1μM。

2.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述的核酸探针的结构为5'Z1-N_m-3'Z2(式I)；

其中，N代表选自A、T、C、G的任一碱基，5'Z1表示位于5'的Z1，其中Z1为荧光基团，所述荧光基团选自下组：ROX、Texas Red、VIC、JOE、HEX、TAMRA、TET、PET、Alexa flour 633(NHS)、Quasar 570、Quasar 670、Cy3、Cy5、Cy5.5、或其组合，而3'Z2表示位于3'端的Z2，Z2为淬灭基团，所述淬灭基团选自下组：BHQ1、BHQ2、或其组合，m为4-20，较佳地，12－14的正整数。

3.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述的检测体系还含有待检测的靶标核酸分子。

4.如权利要求3所述的检测体系，其特征在于，所述靶标核酸分子包括来源于选自下组的靶标核酸分子：植物、动物、昆虫、微生物、病毒、或其组合。

5.如权利要求4所述的检测体系，其特征在于，所述的病毒包括新型冠状病毒。

6.如权利要求4所述的检测体系，其特征在于，所述病毒选自下组：SARS、SARS-CoV-2(COVID-19)、Mers-Cov、或其组合。

7.一种新型冠状病毒核酸分子的检测体系，其特征在于，所述体系包括：

(a)Cas12a蛋白，所述Cas12a蛋白是Cas12a或者具有与Cas12a的旁路单链DNA切割活性类似的Cas蛋白；

(b)crRNA，所述crRNA引导Cas12a蛋白特异性结合于新型冠状病毒N和/或E基因核酸分子；和

(c)核酸探针，所述核酸探针为单链DNA，并且所述核酸探针含有可检测的标记物，其中当所述核酸探针被Cas12a蛋白旁路切割后，产生可检测信号。

8.如权利要求7所述的检测体系，其特征在于，所述的检测体系还包括：(d)核酸扩增引物，所述核酸扩增引物为PCR或LAMP引物对。