[发明专利]一种高效分离纯化海洋微藻藻胆蛋白的方法及藻胆蛋白

权利要求书

1.一种高效分离纯化海洋微藻藻胆蛋白的方法，其特征在于，包括：

步骤一、取新鲜海洋微藻藻液于离心管，将藻液稀释至5×10⁶-5×10⁷cells/mL；二次离心，去上清，获得藻体；将藻体重悬于PEG/盐双水相体系中，获得双水相藻体重悬液；

步骤二、反复冻融步骤一中所述的双水相藻体重悬液，获得微藻细胞破碎液，离心备用；

步骤三、待步骤二中的双水相体系分配平衡后取上相，即为初步纯化的藻胆蛋白提取液；

步骤四、步骤三的藻胆蛋白提取液经纯化、透析除盐获得微藻藻胆蛋白。

2.如权利要求1所述的高效分离纯化海洋微藻藻胆蛋白的方法，其特征在于，步骤四还包括如下步骤：

A、采用羟基磷灰石柱纯化步骤三中所述的藻胆蛋白提取液，获得藻胆蛋白纯化液1；

B、采用阴离子交换柱进一步纯化步骤A中所述的藻胆蛋白纯化液1，获得藻胆蛋白纯化液2；

C、针对步骤B中所述的藻胆蛋白溶液2进行透析除盐，冷冻干燥获得微藻藻胆蛋白成品。

3.如权利要求1或2所述的高效分离纯化海洋微藻藻胆蛋白的方法，其特征在于，海洋微藻包括但不限于螺旋藻、红藻、隐藻。

4.如权利要求1或2所述的高效分离纯化海洋微藻藻胆蛋白的方法，其特征在于，步骤一所述的PEG/盐双水相体系为等体积的PEG/酒石酸钾钠体系，系线长为15-35％，藻体与PEG/盐双水相体系的体积比为0.2-0.4，pH为6.8-8.0。

5.如权利要求1或2所述的高效分离纯化海洋微藻藻胆蛋白的方法，其特征在于，所述步骤二中所述的冻融的次数优选为5-10次，冻融的操作步骤优选为-80至-20℃冷冻结冰，0-4℃融化完全。

6.如权利要求1或2所述的高效分离纯化海洋微藻藻胆蛋白的方法，其特征在于，所述步骤三中所述的双水相体系分配平衡步骤为：将步骤二中的微藻细胞破碎液于3-5℃静置1-5h，直至出现明显的分层。

7.如权利要求2所述的高效分离纯化海洋微藻藻胆蛋白的方法，其特征在于，步骤A中所述的采用羟基磷灰石柱纯化步骤为：采用0.01M、pH为7.0、3-5倍柱体积的磷酸盐缓冲液平衡羟基磷灰石层析柱，平衡后，将初步纯化的藻胆蛋白提取液上样至平衡好的羟基磷灰石柱，上样量为柱床体积的1/3-2/3，上样完毕后用含0.1-0.2M氯化钠、pH为6.5-7.2的磷酸盐缓冲液进行梯度洗脱，磷酸盐缓冲液的浓度梯度分别为0.02、0.05、0.1M，pH为7.0，洗脱线速度为200-300cm/h。

8.如权利要求2所述的高效分离纯化海洋微藻藻胆蛋白的方法，其特征在于，所述步骤B中所述采用阴离子交换柱进一步纯化的步骤为：配置Tris-HCl缓冲液Buffer A、Tris-HCl-NaCl缓冲液Buffer B，过滤；用Buffer A缓冲液平衡离子交换柱；将藻胆蛋白纯化液1直接上样，Buffer B梯度洗脱，收集洗脱液；用盐溶液清洗离子交换柱，然后用碱溶液反向冲洗。

9.如权利要求2所述的高效分离纯化海洋微藻藻胆蛋白的方法，其特征在于，所述步骤C的具体透析步骤为：置于截留量为100-300KDa的透析袋中，并用0.01-0.02M、pH为6.0-7.5的磷酸盐缓冲溶液作为透析液透析12-15h。

10.一种藻胆蛋白，其特征在于，采用如权利要求1-9任一项所述的高效分离纯化海洋微藻藻胆蛋白的方法制备获得。