[发明专利]一种水果致病疫霉菌检测方法及其应用

权利要求书

1.一种水果致病疫霉菌检测方法，其特征在于，包括，

提取疫霉菌菌种DNA，并进行靶基因Ypt1扩增；

筛选疫霉菌菌种通用限制性内切酶，酶切靶基因Ypt1扩增基因片段；区分不同的疫霉菌菌种的毛细管电泳图谱；

比较分析待测植物组织与疫霉菌菌种的毛细管电泳图谱，根据毛细管电泳图谱中波峰的位置进行侵染待测植物组织的疫霉菌菌种鉴定。

2.根据权利要求1所述的水果致病疫霉菌检测方法，其特征在于，所述靶基因Ypt1扩增的特异性引物选用Yph1F_mod2和Yph2R_mod2；所述Yph1F_mod2的基因序列为CGACCATKGGTGTGGACTTTG；所述Yph2R_mod2的基因序列为ACGTTCTCRCAGGCGTATCTG。

3.根据权利要求1所述的水果致病疫霉菌检测方法，其特征在于，所述靶基因Ypt1扩增反应体系组分包括：

正向游引物Yph1F_mod2(25μmol/L)2μL、反向游引物Yph2R_mod2(25μmol/L)2μL、HotStart Taq DNA polymerase(5U/μL)0.25μL、dNTP混合物(2.5mmol/L)4μL、1×PCR buffer(10mmol/L Tris-HCl，pH8.3，50mmol/L KCl和1.5mmol/L MgCl₂)5μL、Bovine SerumAlbumin(4mg/mL)5μL、DNA模板2μL、SDW29.75μL。

4.根据权利要求1所述的水果致病疫霉菌检测方法，其特征在于，所述酶切反应体系组分包括：限制性内切酶(10000U/ml)1μL，10×Q.Cut buffer 3μL，PCR产物10μL，SDW36μL；

所述限制性内切酶选用AluI、MaeII、AfaI、Csp6I及MaeI。

5.根据权利要求1所述的水果致病疫霉菌检测方法，其特征在于，所述限制性内切酶选用AluI和AfaI。

6.根据权利要求5所述的水果致病疫霉菌检测方法，其特征在于，所述选用AluI作为限制性内切酶的酶切反应条件为37℃、60min。

7.根据权利要求1所述的疫霉菌检测方法，其特征在于，所述疫霉菌菌种包括：

栗疫霉(Phytophthora cambivora)、雪松疫霉(P.lateralis)、菜豆疫霉(P.phaseoli)、丁香疫霉(P.syringae)、荔枝霜疫霉(P.litchii)、草莓疫霉(P.fragariae、P.nicotianane、P.cactorum)、瓜类疫霉(P.melonis)、柑橘疫霉(P.hibernalis、P.citricola、P.citrophthora)、栎树猝死疫霉(P.ramorum)、树莓疫霉(P.rubi)、樟疫霉(P.cinnamomi)及棕榈疫霉(P.palmivora)。

8.权利要求1至7任一项所述水果致病疫霉菌检测方法在植物疫霉菌检测中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，用于水果类致病疫霉菌检疫。