[发明专利]一种通用型芽孢杆菌浓缩菌种生产工艺

说明书

本申请涉及菌种浓缩技术领域，具体公开了一种通用型芽孢杆菌浓缩菌种生产工艺,包括以下步骤：（1）培养芽孢杆菌菌种，得到芽孢杆菌发酵液；（2）将芽孢杆菌发酵液、载体、纤维素浆以及纤维素水解酶制剂混合后进行造粒，造粒结束后，将所得颗粒干燥，得到浓缩菌种颗粒，其中，纤维素浆与纤维素水解酶制剂的重量比为1:2.5。通过本申请的工艺，浓缩菌种颗粒中的纤维素分解之后产生的葡萄糖能够为芽孢提供养分，并且纤维素发生分解之后产生与外界连通的通道，加快了芽孢的生效速度。

技术领域

本申请涉及菌种浓缩技术领域，更具体地说，它涉及一种通用型芽孢杆菌浓缩菌种生产工艺。

背景技术

芽孢杆菌是一类广泛分布于土壤、水、空气以及动物肠道等处的细菌，当处于营养缺乏或高温干旱等恶劣环境下时，芽孢杆菌能够暂停绝大部分的生命活动并转变为芽孢，等到环境适宜时再重新萌发，因此对恶劣环境具有较好的耐受性。由于一部分芽孢杆菌在生长过程中能够产生抗菌物质，因此芽孢杆菌也被广泛用于农业生产。目前，在生产芽孢杆菌制剂时，为了降低运输过程对芽孢杆菌造成损伤的可能，一般先将芽孢杆菌转化为芽孢，并通过载体对芽孢进行包覆，然后再进行运输。

公告号为CN104830688B的中国专利公开了一种微生物芽孢体干悬浮剂的制备方法，包括以下步骤：(1)使用离心机对液体发酵微生物芽孢体液进行浓缩，得到浓缩的微生物芽孢体液A；微生物芽孢体液A的浓缩倍数为20～500倍；(2)载体的制备：按重量计，称取硅藻土80～90份、分散剂5～10份、润湿剂2～6份以及保护剂0.05～0.2份并混合均匀，将得到的混合物经气流粉碎后获得载体；(3)将步骤(2)制备的载体加入到造粒设备中，开启造粒设备，并将空气预热至35～40℃，用预热后的空气将载体加热至30～35℃；保持上述载体处于流动过程中，将步骤(1)中得到的微生物芽孢体液A以喷雾的形式与上述加热后的载体混合，且重量比为0.1～2∶100。在该混合过程中，保持造粒温度为30～40℃；0.5～2h后造粒完成，得到微生物芽孢体干悬浮剂。造粒过程中，烘干温度与发酵的温度接近，以降低菌体受损的可能，保持菌体的活性。

针对上述中的相关技术，发明人认为，芽孢在萌发之后进入生长阶段，在生长时需要消耗大量的养分，而载体的包覆作用使得芽孢与外界隔离，与外界隔离的芽孢不易吸收外界土壤中的养分，导致萌发后的芽孢存活率下降，对芽孢杆菌的生效速度造成影响。

发明内容

为了改善在使用过程中，载体将芽孢与外界隔离，对芽孢杆菌的生效速度造成影响的缺陷，本申请提供一种通用型芽孢杆菌浓缩菌种生产工艺。

第一方面，本申请提供一种通用型芽孢杆菌浓缩菌种生产工艺，采用如下的技术方案：

(1)培养芽孢杆菌菌种，得到芽孢杆菌发酵液；

(2)将芽孢杆菌发酵液、载体、纤维素浆以及纤维素水解酶制剂混合后进行造粒，造粒结束后，将所得颗粒干燥，得到浓缩菌种颗粒，其中，纤维素浆与纤维素水解酶制剂的重量比为1:2.5。

通过采用上述技术方案，在造粒过程中，纤维素水解酶制剂、芽孢杆菌发酵液中的芽孢和纤维素浆中的纤维素与载体结合为浓缩菌种颗粒。在实际使用时，载体吸收环境中的水分，使得颗粒内部的湿度不断增加，直到纤维素水解酶的活性恢复。纤维素水解酶的活性恢复之后，能够将纤维素分解为葡萄糖。纤维素被分解后，一方面为萌发后的芽孢提供了碳源，有利于芽孢的复苏，另一方面在浓缩菌种颗粒中留下通道，减少了载体对芽孢的阻隔，使得芽孢在复苏之后更容易从外界吸收养分，从而加快了芽孢杆菌的生效速度。

优选的，步骤(2)中的纤维素浆采用以下方法制备：

(1)将秸秆和废弃木材混合，向混合物中添加轻质碳酸钙粉末，得到制浆原料，其中，轻质碳酸钙粉末的重量与废弃木材和秸秆的总重量之比为1:20。

(2)将制浆原料磨碎后进行煮沸，经检测含水率低于60wt％后停止加热，冷却后得到纤维素浆。