[发明专利]重组猪伪狂犬病毒及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 202110418475.2 | 申请日： | 2021-04-19 |
| 公开（公告）号： | CN113444697A | 公开（公告）日： | 2021-09-28 |
| 发明（设计）人： | 李群辉;林丽苗;周庆丰;曹雪珍;吴雨;李薇;蔡新斌;吴云燕;申翰钦 | 申请（专利权）人： | 温氏食品集团股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/85;A61K39/12;A61P31/14;A61K39/245;A61P31/22;C12R1/93 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 戴志攀 |
| 地址： | 527400 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 狂犬病毒 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种重组猪伪狂犬病毒，其特征在于，所述重组猪伪狂犬病毒为缺失了基因组的第123210～124654位核苷酸，并在缺失的位置插入了猪非典型性瘟病毒E2基因的表达盒的猪伪狂犬病毒变异株GDR。
2.根据权利要求1所述的重组猪伪狂犬病毒，其特征在于，所述猪非典型性瘟病毒E2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
3.根据权利要求1所述的重组猪伪狂犬病毒，其特征在于，所述表达盒所用启动子为CMV启动子。
4.根据权利要求1所述的重组猪伪狂犬病毒，其特征在于，所述表达盒所用终止子为SV40。
5.权利要求1～4任一项所述的重组猪伪狂犬病毒在制备用于预防非典型性猪瘟和伪狂犬病的疫苗中的应用。
6.一种用于预防非典型性猪瘟和伪狂犬病的疫苗，其特征在于，包括权利要求1～4任一项所述的重组猪伪狂犬病毒以及佐剂。
7.一种权利要求1～4任一项所述的重组猪伪狂犬病毒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：构建含有所述猪非典型性瘟病毒E2基因的表达盒的转移载体，将所述转移载体与所述猪伪狂犬病毒变异株GDR进行同源重组，得到所述重组猪伪狂犬病毒。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，构建含有所述猪非典型性瘟病毒E2基因的表达盒的转移载体的方法包括以下步骤：以猪伪狂犬病毒变异株GDR的基因组DNA为扩增模板，分别扩增US7基因区域的左同源臂和US8基因区域的右同源臂，将所述左同源臂、所述猪非典型性瘟病毒E2基因的表达盒和所述右同源臂插入质粒中并使所述猪非典型性瘟病毒E2基因的表达盒位于所述左同源臂和所述右同源臂之间，得到所述转移载体。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，扩增所述左同源臂的引物对如SEQ IDNO:2和SEQ ID NO:3所示，扩增所述右同源臂的引物对如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示。
10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述同源重组的方法包括以下步骤：将所述转移载体与所述猪伪狂犬病毒变异株GDR转染受体细胞，并培养所述受体细胞直至出现病毒蚀斑，然后进行蚀斑纯化。
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