[发明专利]重组猪伪狂犬病毒及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种重组猪伪狂犬病毒及其制备方法和应用，所述重组猪伪狂犬病毒为基因组中插入了猪非典型性瘟病毒E2基因的表达盒的猪伪狂犬病毒变异株GDR。本发明提供了一种重组猪伪狂犬病毒，通过将猪非典型性瘟病毒(APPV)E2基因与猪伪狂犬病毒变异株结合在一起，获得了一种全新的重组猪伪狂犬病毒rPRV‑E2。将猪非典型性瘟病毒E2基因的表达盒插入到猪伪狂犬病毒变异株基因组中，导致缺失了部分US7和US8基因，得到的重组猪伪狂犬病毒不仅安全性好，而且免疫后既能产生针对伪狂犬病毒变异株的抗体，又能产生针对猪非典型性瘟病毒E2蛋白的抗体，为猪伪狂犬病毒‑猪非典型性瘟病毒二联疫苗的研制奠定了基础。

技术领域

本发明涉及动物病毒学领域，特别是涉及一种重组猪伪狂犬病毒及其制备方法和应用。

背景技术

瘟病毒是一类有囊膜高度变异的单股正链RNA病毒，属于黄病毒科瘟病毒属，可感染猪、反刍动物和野生动物等。猪非典型性瘟病毒(atypical porcine pestivirus，APPV)是2015年首次发现的新型瘟病毒(Hause,B.M.,et al,2015.Discovery of a novelputative atypical porcine pestivirus in pigs in the USA.The Journal ofgeneral virology 96,2994-2998)，至今世界范围的十余个国家商业猪群中相继出现了多起APPV感染的病例，不同地区学者分离到的APPV毒株存在很大的变异性。APPV被相继报道与仔猪先天性震颤密切相关。仔猪先天性震颤(CT)，俗称“仔猪抖抖病”或“跳跳病”，是指刚出生仔猪头部、四肢等局部或全身肌肉表现阵发性挛缩的一种疾病，可导致仔猪站立困难、吮乳受阻甚至死亡。患病猪的各种组织均可检测出APPV，但病毒含量最高的为下颌淋巴结，中等病毒含量的为外周淋巴器官(脾脏、扁桃体和腹股淋巴结)、中枢神经系统(脑干、大脑和小脑等)和消化系统(十二指肠)。APPV发病仔猪剖检无明显大体病变，APPV引起的AII型CT仔猪组织病理特征为脑白质空泡化，进一步观察其超微结构为小脑和脊髓髓鞘形成减少和破坏及脑白质髓磷脂崩解。此外免疫组化显示患病猪脊髓少突胶质细胞减少，表明APPV可能对胎儿少突胶质细胞有毒害作用，影响髓磷脂的形成，导致其功能丧失。通过对妊娠母猪以肌注或子宫方式接种APPV，结果显示接种APPV母猪粉面的新生仔猪表现CT症状，且患病仔猪的各种组织样品均检测出APPV，证明了APPV可通过胎盘传播，胎儿发育期感染APPV会造成胎猪中枢神经损伤，从而导致新生仔猪表现CT症状。另外，在出生时表现过CT症状的成年公猪的精液和包皮液中检测出APPV，表明感染过APPV的公猪可短暂性地或持续性地通过精液排毒。研究发现在曾患病猪的唾液腺、十二指肠、结肠和胰腺器官也可检测出APPV，表明APPV可能通过粪口途径传播(Groof A D,Deijs M,Guelen L,et al.AtypicalPorcine Pestivirus:A Possible Cause of Congenital Tremor Type A-II in NewbornPiglets.Viruses,2016,8(10):271)。

APPV作为新发现瘟病毒，与猪瘟病毒(CSFV)之间存在着较远的遗传关系，APPV与CSFV的核苷酸同源性约为50％。APPV基因组两端为非编码区(untranslated region，UTR)即5’-UTR和3’-UTR(从N到C端)，中间是一个大的开放阅读框(opening reading frame,ORF)，ORF编码一个大的多聚蛋白然后切割成较小的蛋白。病毒所有蛋白的编码顺序为：Npro、C、Erns、E1、E2、P7、NS2、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B(Hause,B.M.,et al,2015.Discoveryof a novel putative atypical porcine pestivirus in pigs in the USA.TheJournal of general virology 96,2994-2998)。APPV作为猪中新出现的瘟病毒之一，其相关研究仍处于初步阶段，目前对于猪非典型性瘟病毒尚无预防用生物制品。