[发明专利]基于类酶MOF信号放大传感器的制备

权利要求书

1.基于类酶MOF信号放大传感器的制备，其特征包括以下步骤：

（1）合成ZnO：将导电玻璃ITO切割为4.0×0.5 cm条状，依次用丙酮溶液、二次蒸馏水和无水乙醇超声清洗5 min，在氮气下自然干燥后，使用旋涂法在ITO表面旋涂一层0.25 mol/mL醋酸锌溶液，并且在350 ºC下退火30 min，此后将退火后的ITO浸入到0.025 mol/mL六亚甲基四胺溶液和0.025 mol/mL硝酸锌混合溶液中，在95 ºC下放置6 h后自然冷却至室温，分别用无水乙醇和超纯水洗涤三次，在60 ºC下干燥12 h，得到ZnO；

（2）合成ZnO-ZnIn₂S₄：将0.4 mmol ZnSO₄·7H₂O、0.8 mmol InCl₃·4H₂O、1.6 mmol硫代乙酰胺溶于15 mL水中，常温下搅拌15 min后放置于反应釜中，将步骤（1）中ITO上面生长了ZnO基地置于反应釜中，随后在160 ºC下加热12 h，然后分别用无水乙醇和超纯水洗涤三次，在60 ºC下干燥12 h，得到ZnO-ZnIn₂S₄；

（3）合成MOF：将40 mg 2,2-二吡啶-5,5-二羧酸分散于18 mL N-N二甲基甲酰胺中，将3.06 mg氯化锆加入到此溶液中，超声10 min后将溶液在90 ºC下加热18 h，冷却至室温后在8000 rmp下离心10 min，分散于50 mL四氢呋喃中，然后将106 mg CuCl₂·2H₂O 加入到溶液中，超声10 min，搅拌2 h，得到所需要的MOF材料；

（4）合成SA-MOF：取4 mg步骤（3）合成的MOF溶解于4 mL的乙醇溶液中，随后加入200 μL3-氨丙基三乙氧基硅烷并且超声1 h，得到胺基化MOF材料，将得到的材料离心后分散于2mL的PBS中，然后加入0.2 mL的戊二醛溶液，并在室温下孵育1 h后加入0.2 mL 的2 mg/mL链霉亲和素，在4 ºC下孵育1 h，最后经过清洗、离心，将得到的沉淀溶于2 mL的PBS中，即得到SA-MOF;

（5）合成SA-Ab₂-MOF：取1 mL浓度为10 μg/mL的二抗，即Ab₂加入到步骤（4）合成产物中，在4 °C下孵育2 h，用pH 7.4的磷酸盐缓冲液洗涤3次去除没有复合的Ab₂，即得到SA-Ab₂-MOF；

（6）光电化学传感器的构建：将6 μL浓度为10 μg/mL的一抗即Ab1滴加在合成ZnO-ZnIn₂S₄中，并在4 ºC下孵育16 h，用pH 7.4的磷酸盐缓冲液彻底冲洗3次；继续滴涂20 µL3%的牛血清白蛋白封堵非特异性结合位点，用pH 7.4的磷酸盐缓冲液彻底冲洗3次，将20 μL不同浓度前列腺抗原滴加至电极表面，室温下孵育30 min，用pH 7.4的磷酸盐缓冲液洗涤3次；继续滴加20 μL步骤（5）合成的SA-Ab₂-MOF，室温下孵育2 h；

（7）夹心型信号放大生物传感器的光电化学检测：在步骤（6）处理好的修饰电极作为工作电极，对电极是铂丝电极，参比电极是Ag/AgCl电极，偏压数值为0 V，氙灯作为光源刺激，电解池为pH 7.4的磷酸盐缓冲液体系（1 mol/L的过氧化氢），测定电流I-T曲线来进行光电性能的检测。