[发明专利]一种针头取样-微萃取-催化显色检测生物胺的方法

说明书

本发明公开了一种针头取样‑微萃取‑催化显色检测生物胺的方法。属于食品分析技术领域。该方法的基本原理是BAs在二胺氧化酶(DAO)的催化作用下氧化产生H₂O₂，接着ATO催化BAs所产生的H₂O₂氧化3,3,5,5‑四甲基联苯胺(TMB)显色，通过检测H₂O₂的量间接检测BAs含量。该方法对组胺、腐胺和尸胺的选择性良好，标准曲线的线性范围为5～50μM和50～1000μM，检测限为1.52μM。本发明方法成功检测了肉样中的BAs含量(以其中组胺、腐胺和尸胺的总量为衡量标准)，以指示肉类的腐败程度。

技术领域

本发明属于食品分析技术领域，涉及一种针头取样-微萃取-催化显色检测生物胺的方法，特别是涉及一种基于针头取样法结合液相微萃取和类过氧化物酶催化显色反应检测肉类样品中生物胺的方法。

背景技术

生物胺(BAs)存在于各种富含蛋白质的食物中，比如肉类、奶制品和水产等，是一类低分子量的含氮化合物，包括腐胺、尸胺、组胺等。食物中的某些蛋白质可能会分解成游离氨基酸存在于食物中。如果食物被含有脱羧酶的细菌污染，这些游离氨基酸会进行脱羧反应释放出BAs。食品中的BA含量与其腐败情况和质量安全密切相关，因此BAs被认为是肉类和肉制品在储存过程中新鲜度和卫生的标志物。腐败变质食物中的BA会散发出特殊气味，这不仅影响食品的风味，更为重要的是会对人的生命健康构成潜在威胁。例如，当BAs累积到一定浓度时，容易引发哮喘、过敏反应、食物中毒、偏头痛、血压异常、口腔科疾病等症状。组胺是毒性最大的BAs，其阈值在欧洲渔业产品中立法确立，富含组氨酸的鱼类中组胺含量不得超过200mg/kg；若在盐水中经过发酵处理的鱼类，其组胺含量不得超过400mg/kg。腐胺和尸胺的存在会增强组胺的毒性，它们还会在食品中与亚硝酸盐和硝酸盐形成致癌的N-亚硝胺。因此，组胺、腐胺和尸胺常被作为食品腐败的标志物。由此可见，肉类食品腐败所产生的BA会对人体产生严重危害。而肉类作为人类最常见的营养来源之一，其质量安全与人的生命健康息息相关。因此，快速、灵敏、简便地测定肉类中的BAs含量十分必要。

目前，科研人员已经开发了多种可以用于BAs检测的方法，例如色谱法、毛细管电泳法、化学发光法、比色分析法以及酶联免疫吸附测定等，但这些方法难以避免复杂昂贵的仪器和繁复的前处理过程，并且容易造成样品的浪费，因此更加经济环保、操作简便的BAs分析方法亟待开发。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种针头取样-微萃取-催化显色检测生物胺的方法。

技术方案：为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种针头取样-微萃取-催化显色检测生物胺的方法，具体操作步骤如下：

(1.1)、先向离心管中加入DAO溶液，再加入BAs溶液，反应20-35min，加入混合显色液，反应10-25min，随后用超微量紫外-可见分光光度计在650nm处进行检测，绘制BAs与紫外强度相关的标准曲线；

(1.2)、用注射泵吸取DAO溶液，将针头扎入肉样中，顺时针逆时针各旋转一周，将针头斜面压在肉样上取出，将注射泵与针头组装，推动注射泵活塞，打一滴DAO溶液，使肉样浸润在其中反应25-40min；

(1.3)、拉动注射器活塞，将萃取了BAs的液滴抽回，用干净针头取出肉样，用注射器吸取混合显色液，反应10-25min；

(1.4)、检测时，打出一滴用超微量紫外-可见分光光度计对显色液滴进行分析检测其中氧化TMB的紫外-可见光强度，从上述标准曲线上计算肉样中BAs的浓度。

进一步的，在步骤(1.1)中，所述DAO溶液：浓度为5mg/mL，溶剂0.1M PBS，pH 7.2。