[发明专利]用于检测阴道加德纳菌荧光免疫层析试纸条、试剂盒及应用

权利要求书

1.用于检测阴道加德纳菌的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述试纸条包括底板，所述底板延其长度方向顺次设置有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸样垫，其中，所述结合垫上固定有荧光微球标记的抗阴道加德纳菌单克隆抗体，硝酸纤维素膜上设置有检测T线和质控C线，检测T线上包被有与荧光微球标记的单克隆抗体配对的阴道加德纳菌单克隆抗体，质控C线上包被有与荧光微球标记的单克隆抗体配对的二抗IgG。

2.根据权利要求1所述的用于检测阴道加德纳菌的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述结合垫由包括以下步骤的方法制备得到：

(1)抗体反应：按重量比，将抗阴道加德纳菌单克隆抗体与荧光微球按1:15～50的比例混合，36～38℃条件下反应1～3h，得到荧光微球标记的抗阴道加德纳菌单克隆抗体；

(2)封闭；

(3)铺结合垫：将荧光微球标记的抗阴道加德纳菌单克隆抗体以浓度2～12μL/cm均匀喷涂在结合垫上，进行干燥。

3.根据权利要求2所述的用于检测阴道加德纳菌的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，步骤(2)中，封闭方法包括以下步骤：

(2-1)封闭1：加入2M甘氨酸和1M乙醇胺，37℃封闭30min；

(2-2)封闭2：加入BSA、兔IgG，其中，BSA与荧光微球比例为4～2:1，兔IgG与荧光微球比例为1：25，混匀后4℃过夜封闭。

4.根据权利要求2所述的用于检测阴道加德纳菌的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，步骤(1)前，将荧光微球进行如下处理步骤：

(a)缓冲液置换：取荧光微球加入MES缓冲液离心，去除上清，加入少量MES超声重悬，待用；

(b)活化：向荧光微球中加入NHS和EDC，混匀，37℃旋转反应30min；

(c)清洗：活化结束后，加入MES缓冲液离心，去除上清，加入少量MES超声重悬，重复一次；加入HEPES缓冲液超声重悬，补满HEPES离心，加HEPES缓冲液重悬后待用。

5.根据权利要求1所述的用于检测阴道加德纳菌的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述检测T线的制备方法为：使用划膜稀释液将阴道加德纳菌单克隆抗体稀释至1.0～2.5mg/mL，并以0.5-2μL/cm的划液量、50mm/s划膜速度固定在硝酸纤维素膜上，其中，划膜稀释液为含10g/L蔗糖的0.01mol/L PBS，pH 7.0～7.4。

6.根据权利要求1所述的用于检测阴道加德纳菌的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述质控C线的制备方法为：使用划膜稀释液将二抗IgG稀释至1.0～2.5mg/mL，并以0.5-2μL/cm的划液量、50mm/s划膜速度固定在硝酸纤维素膜上，其中，划膜稀释液为含10g/L蔗糖的0.01mol/L PBS，pH 7.0～7.4。

7.阴道加德纳菌的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的试纸条、SD卡和样品稀释液，

所述SD卡内存储有所述试纸条的标准曲线；

所述样品稀释液为0.01～0.05mol/L的PBS缓冲液，pH 7.0～7.5，PBS缓冲液中含有0.1％～1％的吐温20或Triton-100。

8.根据权利要求7所述的阴道加德纳菌的检测试剂盒，其特征在于，所述SD卡的制作方法包括以下步骤：

(1)建立阴道加德纳菌平板计数法与光密度法关系曲线；

(2)制备阴道加德纳菌参考品；

(3)用样品稀释液稀释参考品，得到多个浓度的校准品；

(4)测定步骤(3)所得的多个校准品在荧光免疫分析仪上检测信号值；

(5)根据标准品的浓度和对应的检测信号值拟合生成标准曲线，并录入SD卡中。

9.权利要求1所述的用于检测阴道加德纳菌的荧光免疫层析试纸条的应用。

10.权利要求7所述的阴道加德纳菌的检测试剂盒的应用。