[发明专利]一种葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法

权利要求书

1.一种葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，包括如下步骤：

量取浓硫酸、正丁醇，置于带干燥管和搅拌装置的三颈瓶中，搅拌，冰浴冷却至-5~-8℃，缓慢加入200目的酵母葡聚糖粉末5-7g；

反应6-8min后，反应体系用NaOH中和，离心，蒸馏水透析18-24h，减压浓缩至20-22mL，加入体积分数95％乙醇，静置后离心，收集沉淀物，将沉淀物溶解于水，再透析18-24h，透析液经冷冻干燥后得葡聚糖硫酸酯；

采用截留分子量分别为4K和10K的聚醚砜膜对葡聚糖硫酸酯进行二级超滤分级,得到3个级分；

以毛细管黏度计测试样品的特性粘度；

采用SD大鼠给药20-60min后,以复方噻胺酮(10ml/kg)肌肉注射麻醉,从心脏取血于塑料试管中,1-2min后每隔10s缓慢倾斜试管1次,记录倾斜试管时液面不动时间,即为CT；

大鼠腹腔动脉采血,加入预先盛有0.1ml3.8%枸橼酸钠的试管中,并在每支试管中加入待测样品,37-38℃水浴中孵育1min,每支试管中再加入0.1ml0.01mol/L的CaCl₂,混匀后开始计时,记录倾斜试管时液面不动时间,即为RT；

通过CT值和RT值判断3个级分对抗凝血活性的影响。

2.根据权利要求1所述的葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，其特征在于：所述浓硫酸与正丁醇的比例为1∶7-9。

3.根据权利要求1所述的葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，其特征在于：所述二级超滤分级分为第一级超滤膜分级和第二级超滤膜分级。

4.根据权利要求3所述的葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，其特征在于：所述第一级超滤膜分级采用截留分子量为10K的聚醚砜膜将葡聚糖硫酸酯分为10K以上和10K以下两个级分。

5.根据权利要求3所述的葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，其特征在于：所述第二级超滤分级采用截留分子量为4K的聚醚砜膜得到4-10K和4K以下两个级分。

6.根据权利要求1所述的葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，其特征在于：所述毛细管黏度计长度为140±5mm 内径为0.5±0.05mm 测定球的容积为3.5±0.5ml。

7.根据权利要求1所述的葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，其特征在于：所述以毛细管黏度计测试样品的特性粘度方法如下：称取干燥的样品，用蒸馏水配制成溶液用毛细管黏度计在20-30℃下分别测定相同容积样品和蒸馏水流出时间计算出相对粘度η，并通过多点稀释倒推的方法计算样品的特性粘度。

8.根据权利要求7所述的葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，其特征在于：所述多点稀释倒推的方法为：将多个不同浓度的样品相对粘度η与浓度绘制成曲线图，通过曲线图平缓点分析出样品的特性粘度。

9.根据权利要求1所述的葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，其特征在于：所述SD大鼠的实验数量为160-190只，雌雄数量各半。