[发明专利]稳定表达NS1蛋白的犬肾细胞系MDCK-pCDH-NS1及其构建方法和应用在审
| 申请号： | 202110424534.7 | 申请日： | 2021-04-20 |
| 公开（公告）号： | CN113322282A | 公开（公告）日： | 2021-08-31 |
| 发明（设计）人： | 李守军;肖伟祺;周沛;符雪滢;张浩洋;董杰 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/44;C12N5/10 |
| 代理公司： | 广州正明知识产权代理事务所(普通合伙) 44572 | 代理人： | 张丽 |
| 地址： | 510000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 稳定 表达 ns1 蛋白 细胞系 mdck pcdh 及其 构建 方法 应用 | ||
1.稳定表达NS1蛋白的犬肾细胞系MDCK-pCDH-NS1的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、构建pCDH-NS1过表达载体：
将目的基因NS1连接至pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-Puro载体上，得到重组质粒pCDH-NS1；
S2、慢病毒包装：
将重组质粒pCDH-NS1和PsPaX2、PMD2.G三质粒共转染至人胚胎肾上皮细胞HEK293T中进行慢病毒包装；
S3、稳定表达细胞系的构建：
将S2包装后的慢病毒感染MDCK细胞，利用嘌呤霉素筛选方法获得稳定表达NS1蛋白的犬肾细胞系MDCK-pCDH-NS1。
2.根据权利要求1所述的稳定表达NS1蛋白的犬肾细胞系MDCK-pCDH-NS1的构建方法，其特征在于，S2中，pCDH-NS1和PsPaX2、PMD2.G的用量比为3：3：2。
3.根据权利要求1所述的稳定表达NS1蛋白的犬肾细胞系MDCK-pCDH-NS1的构建方法，其特征在于，S1所述目的基因是以3×Flag-NS1质粒为模板，设计引物pCDH-F和pCDH-R扩增得到。
4.权利要求1至3任一项所述的构建方法获得的稳定表达NS1蛋白的犬肾细胞系MDCK-pCDH-NS1。
5.权利要求4所述稳定表达NS1蛋白的犬肾细胞系MDCK-pCDH-NS1在高产NS1蛋白中的应用。
6.权利要求4所述稳定表达NS1蛋白的犬肾细胞系MDCK-pCDH-NS1作为筛选与NS1蛋白相互作用互作蛋白的模型细胞的应用。
7.权利要求4所述稳定表达NS1蛋白的犬肾细胞系MDCK-pCDH-NS1在研究流感病毒与宿主细胞之前相互作用机制中的应用。
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