[发明专利]一种基于bt2分子标记选育甜糯双隐性玉米自交系的方法

权利要求书

1.一种基于bt2分子标记选育甜糯双隐性玉米自交系的方法，其特征在于，由以下步骤组成：

步骤S1，使用《中华人民共和国农业行业标准NY/T1432-2014玉米品种鉴定技术规程SSR标记法》所公布的40对SSR分子标记，通过PCR实验对现有糯玉米品种进行等位基因分型，然后计算它们的遗传相似系数，再进行遗传多样性分析，通过群体结构划分，选择6个遗传距离相近的糯玉米材料组建糯玉米育种群体，经过充分混粉杂交后，应用混合选择法对该群体的产量、抗病性及其主要性状进行选择而构建NA群；

步骤S2，提取现有甜玉米品种的DNA，利用bt2基因的特异性引物B1、B2检测甜玉米bt2基因，筛选出bt2bt2基因型的甜玉米材料；特异性引物B1的碱基序列如SEQ ID NO.1，特异性引物B2的碱基序列如SEQ ID NO.2所示；

步骤S3，使用《中华人民共和国农业行业标准NY/T1432-2014玉米品种鉴定技术规程SSR标记法》所公布的40对SSR分子标记，通过PCR实验对步骤S2筛选得到的甜玉米材料进行等位基因分型，然后计算它们的遗传相似系数，再进行遗传多样性分析，通过群体结构划分，选择4个遗传距离相近的甜玉米材料，经过充分混粉杂交后，应用混合选择法对该群体的产量、抗病性及其主要性状进行选择而构建TA群；

步骤S4，将步骤S1得到的糯玉米NA群品系与步骤S3得到的甜玉米TA群品系杂交，利用bt2基因的特异性引物B1、B2筛选出含隐性bt2基因的糯质玉米自交一代作为候选供体亲本，从中选择褶皱籽粒，即得到甜糯双隐性单株，入选的单株再经三世代的优选株自交得到甜糯双隐性玉米自交系。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S1和步骤S2中的遗传距离相近为遗传相似系数＞0.7。

3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，在使用混合选择法构建NA群时，产量选择标准为：选择种植密度为60000株/hm²时平均产量＞3000kg/hm²的糯玉米材料。

4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，抗病性选择标准为：进行田间抗病性鉴定，选择达到高抗大斑病(1级)、高抗小斑病(1级)、抗青枯病(3级)、抗锈病(3级)的糯玉米材料。

5.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S3中，在使用混合选择法构建TA群时，产量选择标准为：选择种植密度为60000株/hm²时平均产量＞2250kg/hm²的甜玉米材料。

6.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S3中，抗病性选择标准为：进行田间抗病性鉴定，选择达到高抗大斑病(1级)、高抗小斑病(1级)、抗青枯病(3级)、抗锈病(3级)的甜玉米材料。

7.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S2中，以现有甜玉米品种的DNA为模板，使用特异性引物B1、B2进行PCR检测，PCR产物经电泳检测，选取电泳检测出1316bp目的条带的甜玉米材料。

8.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4在选择优选株时，选择产量高和抗病性好的植株，

产量选择标准：选择种植密度为60000株/hm²时平均产量＞2250kg/hm²的玉米材料；

抗病性选择标准：进行田间抗病性鉴定，选择达到高抗大斑病(1级)、高抗小斑病(1级)、抗青枯病(3级)、抗锈病(3级)的玉米材料。

9.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4包括：

S41，将步骤S1得到的糯玉米NA群品系与步骤S3得到的甜玉米TA群品系杂交，所述糯玉米NA群品系的基因型为wxwxBt2Bt2，所述甜玉米TA群品系的基因型为WxWxbt2bt2；得到F1代，F1代的基因型为WxwxBt2bt2，将F1代自交得到F2代，即自交一代；

S42，配制碘-碘化钾染色试剂，筛选F2代中的糯质籽粒，将稀释的碘-碘化钾染色试剂滴于刮开的玉米胚乳上，显紫红色的为糯质籽粒，显蓝色的为普通籽粒；

S43，将糯质籽粒播种，苗期提取DNA作为模板，用PCR使用特异性引物B1、B2进行PCR检测，PCR产物经电泳检测，选取电泳检测出1316bp目的条带的糯玉米自交一代作为候选供体亲本；

S44，从候选供体亲本中选择褶皱籽粒，即得到甜糯双隐性单株，入选的单株再经三世代的优选株自交得到甜糯双隐性玉米自交系。