[发明专利]一种利用家蚕丝腺大规模生产荧光蛋白的方法有效
| 申请号： | 202110426146.2 | 申请日： | 2021-04-20 |
| 公开（公告）号： | CN113173983B | 公开（公告）日： | 2023-04-18 |
| 发明（设计）人： | 夏庆友;王峰;赵萍;田弛 | 申请（专利权）人： | 西南大学 |
| 主分类号： | C07K14/435 | 分类号： | C07K14/435;C07K1/34;C12P21/06 |
| 代理公司： | 重庆智慧之源知识产权代理事务所(普通合伙) 50234 | 代理人： | 余洪;高彬 |
| 地址： | 400715*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 家蚕 大规模 生产 荧光 蛋白 方法 | ||
1.一种利用家蚕丝腺大规模生产荧光蛋白的方法，其特征在于：将构建的生产荧光蛋白的家蚕品系HFRS与家蚕品系“两广二号”LG杂交后自交得到F2代家蚕，选取蚕茧的茧色为粉红色个体作为转基因家蚕品种；将转基因家蚕品种蚕茧粉碎后，溶解于pH为9.0、含质量分数0.3％碱性蛋白酶的Tris-HCl溶液中在50℃-55℃水浴提取DsRed1蛋白，超滤浓缩后得到DsRed1浓缩液；对所述DsRed1浓缩液在25℃-75℃下进行碱性蛋白酶灭活得到荧光蛋白溶液。
2.如权利要求1所述一种利用家蚕丝腺大规模生产荧光蛋白的方法，其特征在于，荧光蛋白转基因家蚕品种的培育的方法为：
将构建的生产荧光蛋白的家蚕品系HFRS与家蚕品系“两广二号”LG进行杂交得到F1代，将F1代家蚕饲养至结茧后，将F1代家蚕进行自交得到F2代，在F2代结茧后选取蚕茧的茧色为粉红色的个体作为转基因家蚕品种，命名为LG-HFRS-F2。
3.如权利要求1所述一种利用家蚕丝腺大规模生产荧光蛋白的方法，其特征在于，所述DsRed1蛋白的提取过程为：将转基因家蚕品种的蚕茧加入研磨机粉碎，将粉碎后的蚕茧溶解于含有碱性蛋白酶的Tris-HCl溶液中，在50℃-55℃下水浴提取；提取后进行过滤后收集滤液，然后分别用滤纸、微孔滤膜进行再次过滤得到DsRed1提取液。
4.如权利要求3所述一种利用家蚕丝腺大规模生产荧光蛋白的方法，其特征在于：所述DsRed1蛋白提取时蚕茧与溶液的浴比为10-25mg/mL。
5.如权利要求3所述一种利用家蚕丝腺大规模生产荧光蛋白的方法，其特征在于：所述Tris-HCl溶液的pH值为9.0。
6.如权利要求3所述一种利用家蚕丝腺大规模生产荧光蛋白的方法，其特征在于：所述碱性蛋白酶的活力为大于200000u/g。
7.如权利要求1所述一种利用家蚕丝腺大规模生产荧光蛋白的方法，其特征在于：所述超滤浓缩选用50000MWCO超滤管对DsRed1提取液进行浓缩得到DsRed1浓缩液。
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