[发明专利]一种定量检测CYFRA21-1的磁微粒化学发光试剂盒及其制作方法

说明书

本发明提供一种定量检测CYFRA21‑1的磁微粒化学发光试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：CYFRA21‑1抗体磁微粒悬浮液；吖啶酯标记CYFRA21‑1抗体；CYFRA21‑1校准品；CYFRA21‑1质控品；浓缩洗涤液；激发液和预激发液；反应管；组份少，只有磁性微球溶液和示踪物结合物组成，不需要加入生物素、链霉亲和素、辣根过氧化物酶等成分；速度快，无需酶的催化，利用吖啶酯直接发光；灵敏度高，本发明的分析灵敏度不高于0.1ng/mL；范围宽，本发明线性范围0.1‑500 ng/mL；精密性良好，批内不精密度不高于5%，批间不精密度不高于10%；稳定性良好；特异性良好，本发明对神经元特异性烯醇化酶（NSE）（300ng/mL）、癌胚抗原（CEA）（500ng/mL）交叉反应率0.05%；成本低，本发明性能良好，成本低，具有临床应用价值。

技术领域

本发明涉及一种CYFRA21-1的磁微粒化学发光试剂盒。

具体地说，是涉及一种定量检测CYFRA21-1的磁微粒化学发光试剂盒。

背景技术

CYFRA21-1（Cytokeratin19Fragment）是细胞角蛋白19的可溶性片段，细胞角蛋白（cytokeratins)是形成上皮细胞的结构蛋白之一中间丝的亚单位。根据其分子量和双向电泳中等电点的不同，可以分为20种不同类型。它们被分为两个亚群：Ⅰ类(酸性蛋白)，Ⅱ类(碱性蛋白)。细胞角蛋白是由Ⅰ类和Ⅱ类角蛋白组成的异聚合体。细胞角蛋白19（CYK-19)是一分子量约40000Da的Ⅰ类角蛋白（酸性蛋白），是角蛋白家族中最小的成员。CYK-19广泛分布在正常组织表面，如层状或鳞状上皮中。在恶性上皮细胞中，激活的蛋白酶加速了细胞的降解，使得大量细胞角蛋白片段释放入血，其可溶性片段可与两株单克隆抗体KS19.1和BM19.21特异性结合，故称为CYFRA21-1，分子量约30000Da。在恶性肺癌组织中，CYFRA21-1含量丰富，尤其是在肺鳞癌中有高表达。

CYFRA21-1是一种主要用于检测肺癌的肿瘤标记物，尤其对非小细胞肺癌（non-smallcelllungcancer，NSCLC)的诊断具有重要价值。在各类非小细胞肺癌的阳性率为70%～85%，其血清水平含量与肿瘤临床分期呈正相关，故亦可用作临床分期评价和治疗效果的评价以及术后预期的评估。

CYFRA21-1检测的方法主要有胶体金法、放射免疫法、酶联免疫法、化学发光酶免法、直接化学发光免疫法、电化学发光免疫分析等。

1、胶体金法是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金法又可分为斑点免疫金渗滤法和胶体金免疫层析法，主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中，胶体金技术具有方便快捷、特异敏感、稳定性强、不需要特殊设备和试剂、结果判断直观等优点，因而特别适合于广大基层检验人员以及大批量检测和大面积普查等，缺点只能定性，即只能判断阴阳或半定量，测值不准无法具体确定CYFRA21-1的含量。

2、放射免疫技术为一种将放射性同位素测量的高度灵敏性、精确性和抗原抗体反应的特异性相结合的体外测定超微量物质的技术。应用放射性同位素标记的抗原或抗体，通过免疫反应测定的技术，都可称为放射免疫技术，经典的放射免疫技术是标记抗原与未标抗原竞争有限量的抗体，然后通过测定标记抗原抗体复合物中放射性强度的改变，测定出未标记抗原量。该技术存在放射线辐射和污染等问题基本以被市场淘汰。