[发明专利]一种基于喷施Kana鉴定转基因拟南芥的方法

说明书

本发明公开了一种基于喷施Kana鉴定转基因拟南芥的方法，包括以下步骤：S1、确定实验用Kana的适用浓度区间；S2、选取适应浓度的Kana筛选抗性的拟南芥；S3、TPS法提取成活拟南芥的DNA；S4、进行PCR验证；S5、得出结论。本发明首先培养野生型拟南芥，用来确定用Kana喷施的适用浓度区间，为接下来的筛选突变体拟南芥确定一个合适的Kana浓度值，提高实验的准确性和成功率；再培养T0代拟南芥，用上述合适浓度的Kana喷施，存活下来的拟南芥具有抗性，可作为检测时的样本，经过继续培养后进行取样PCR检查，减少了培养的时间，提高了实验效率；利用基质来培养拟南芥，基质成分简单，较容易灭菌，培养时污染较少，Kana溶液通过喷洒的方式进行施加，操作简单。

技术领域

本发明涉及农业技术领域，具体涉及一种基于喷施Kana鉴定转基因拟南芥的方法。

背景技术

现有的鉴定转基因拟南芥的方式通常是通常是用MS培养基对拟南芥进行培养，这种方式的培养对于新手来说，污染率高，进而失败率较高；另一方面，不同拟南芥的抗性不同，对于药剂的浓度，根据前人的实验数据直接培植，容易产生偏差和失败。

为此，我们提出一种基于喷施Kana鉴定转基因拟南芥的方法，使得效率更高，操作更简单。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于喷施Kana鉴定转基因拟南芥的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种基于喷施Kana鉴定转基因拟南芥的方法，包括以下步骤：

S1、确定实验用Kana的适用浓度区间；

S2、选取适应浓度的Kana筛选抗性的拟南芥；

S3、TPS法提取成活拟南芥的DNA；

S4、进行PCR验证；

S5、得出结论。

在本发明的一种实施例中，S1的实验过程包括以下步骤：

第一步，将普通拟南芥密播于育苗块上，放入智能光照培养箱培养，每天光照时间为16h，黑暗时间为8h，光强3000-3500Lux，温度21-23℃，相对湿度为60-75％；

第二步，培养预定时间后，约7天，待拟南芥子叶展开，将其平均分为三组，三组分别喷施50mg/L、75mg/L、100mg/L的Kana溶液，每天喷预定的次数，每次喷施的量相等，喷施kana溶液期间不浇水；

第三步，喷施14到21天后，观察野生型拟南芥生长状态，喷施50mg/L Kana溶液的育苗块，还有健康的普通型拟南芥存活，而喷施75mg/L的Kana溶液的育苗块，普通型拟南芥死亡率超过70％，而喷施100mg/L的Kana溶液的育苗块，普通型拟南芥死亡率超过95％；

第四步，选取75-110mg/L的Kana溶液作为下一步实验的实验药剂。

优选的，选择100mg/L的Kana溶液作为实验药剂。

因为下一步实验时，实验材料为带有Kana抗性的转基因拟南芥，其对Kana溶液具有抗性，浓度过低的情况下，普通拟南芥和带有Kana抗性的转基因拟南芥都能存活，则无法将带有Kana抗性的转基因拟南芥筛选出来。

在本发明的一种实施例中，普通拟南芥选取为野生拟南芥。

在本发明的一种实施例中，在S2中，选取带有Kana抗性的T0代转基因拟南芥进行培植；

将带有Kana抗性的T0代转基因拟南芥密播于育苗块，放入培养箱培养，16h光照/8h黑暗，光强3000-3500Lux，温度21-23℃，相对湿度为60-75％，待拟南芥子叶展开，每天喷施预定次数的100mg/L的Kana溶液，每次喷施的量相等，期间不浇水；