[发明专利]基于三重并联杂交链式反应的破伤风抗原的均相超灵敏二维可视化和荧光分析方法及应用

权利要求书

1.一种基于三重并联杂交链式反应的破伤风抗原的均相超灵敏二维可视化和荧光分析方法，其特征在于，所述方法包括核酸适配体和破伤风抗原基于三重并联杂交链式反应获得长双链DNA，在抗坏血酸和Cu²⁺存在下，形成DNA模版Cu NPs，监测DNA模版Cu NPs的荧光信号，并基于DNA模版Cu NPs的荧光信号定量单一目标物，所述单一目标物为破伤风抗原；

所述方法包括一条长双链DNA和6个发卡结构，首先核酸适配体Aptamer2和P4、P5以及P6单链DNA形成一条长双链DNA，在加入破伤风抗原时，其与Aptamer2结合，释放出游离的P4、P5和P6单链DNA，释放出的单链DNA分别与H1-H6发卡结构结合，促发三个HCR反应同时发生，形成另外三条长双链DNA；形成的另外三条长双链DNA作为CuNPs的模版，在抗坏血酸和Cu²⁺存在时，在室温下形成DNA模版CuNPs，监测DNA模版CuNPs的荧光信号，并基于DNA模版CuNPs的荧光信号定量单一目标物，所述单一目标物为破伤风抗原；

所述二维可视化为基于距离变化和颜色变化读取的可视化分析方法。

2.根据权利要求1所述的基于三重并联杂交链式反应的破伤风抗原的均相超灵敏二维可视化和荧光分析方法，其特征在于，所述DNA模版Cu NPs的激发波长为340nm。

3.一种基于三重并联杂交链式反应的破伤风抗原的均相超灵敏二维可视化和荧光分析方法，其特征在于，所述方法包括核酸适配体和破伤风抗原基于三重并联杂交链式反应获得长双链DNA，在抗坏血酸和Cu²⁺存在下，形成DNA模版Cu NPs，并基于QDs选择性识别Cu²⁺和DNA模版Cu NPs，监测QDs的荧光信号，并基于QDs的荧光信号定量单一目标物，所述单一目标物为破伤风抗原；

所述QDs为CdTe QDs；

所述方法包括一条长双链DNA和6个发卡结构，首先核酸适配体Aptamer2和P4、P5以及P6单链DNA形成一条长双链DNA，在加入破伤风抗原时，其与Aptamer2结合，释放出游离的P4、P5和P6单链DNA，释放出的单链DNA分别与H1-H6发卡结构结合，促发三个HCR反应同时发生，形成另外三条长双链DNA；形成的另外三条长双链DNA作为CuNPs的模版，在抗坏血酸和Cu²⁺存在时，在室温下形成DNA模版CuNPs，基于CdTe QDs选择性识别Cu²⁺和DNA模版CuNPs，监测CdTe QDs的荧光信号，并基于CdTe QDs的荧光信号定量单一目标物，所述单一目标物为破伤风抗原；

所述二维可视化为基于距离变化和颜色变化读取的可视化分析方法。

4.一种基于三重并联杂交链式反应的破伤风抗原的均相超灵敏二维可视化和荧光分析方法，其特征在于，所述方法包括核酸适配体和破伤风抗原基于三重并联杂交链式反应获得长双链DNA，在抗坏血酸和Cu²⁺存在下，形成DNA模版Cu NPs，并基于QDs选择性识别Cu²⁺和DNA模版Cu NPs，监测QDs的荧光信号，并基于QDs的荧光信号定量单一目标物，同时将QDs喷墨打印在试纸上，构建基于距离变化读取的可视化分析定量单一目标物，其与颜色读取整合后构建为颜色和距离二维可视化读取模式，所述单一目标物为破伤风抗原；

所述QDs为CdTe QDs；

所述方法包括一条长双链DNA和6个发卡结构，首先核酸适配体Aptamer2和P4、P5以及P6单链DNA形成一条长双链DNA，在加入破伤风抗原时，其与Aptamer2结合，释放出游离的P4、P5和P6单链DNA，释放出的单链DNA分别与H1-H6发卡结构结合，促发三个HCR反应同时发生，形成另外三条长双链DNA；形成的另外三条长双链DNA作为CuNPs的模版，在抗坏血酸和Cu²⁺存在时，在室温下形成DNA模版CuNPs，基于CdTe QDs选择性识别Cu²⁺和DNA模版CuNPs，监测CdTe QDs的荧光信号，并基于CdTe QDs的荧光信号定量单一目标物，所述单一目标物为破伤风抗原；

所述二维可视化为基于距离变化和颜色变化读取的可视化分析方法。