[发明专利]基于三重并联杂交链式反应的破伤风抗原的均相超灵敏二维可视化和荧光分析方法及应用

说明书

本发明提供了一种基于三重并联杂交链式反应的破伤风抗原的均相超灵敏二维可视化和荧光分析方法及应用，涉及生物医学诊断分析方法技术领域，其包括核酸适配体和破伤风抗原基于三重并联杂交链式反应获得长双链DNA，形成DNA模版CuNPs，并基于QDs选择性识别Cusupgt;2+/supgt;和DNA模版CuNPs，监测QDs的荧光信号，并基于QDs的荧光信号定量单一目标物，同时将QDs喷墨打印在试纸上，构建基于距离变化读取的可视化分析，其与颜色读取整合后构建为颜色和距离二维可视化读取模式。本发明引入颜色和距离二维可视化分析，结合无酶核酸放大技术，在改善分析灵敏度的同时，为今后基层医院和偏远地区破伤风的POCT检测奠定基础。

技术领域

本发明涉及生物医学诊断分析方法技术领域，尤其是涉及一种基于三重并联杂交链式反应的破伤风抗原的均相超灵敏二维可视化和荧光分析方法及应用。

背景技术

破伤风是一种极为严重的疾病，每年约有100万人死于破伤风。平均病死率为20％-30％，新生儿及老年人的病死率尤其高。其潜伏期通常为7-8天，可短至24小时，平均治疗费用10万元以上。现已有破伤风类毒素抗体IgG的酶联免疫吸附分析(ELISA)试剂盒，但其操作复杂、成本高、灵敏度低、难以家庭便携式诊断。最为重要的是抗体检测仅是一种间接方法，易受机体影响。其抗原(痉挛毒素)的检测对破伤风诊断是直接且有效的。然而，现有医学诊断机构内对破伤风抗原的检测几乎处于空白。因此，发展高灵敏破伤风抗原的检测方法是具有重要意义的。

申请人已申请了名称为“一种破伤风抗原的检测方法及其应用”，申请号为“202011168842.X”的发明专利，详细介绍了破伤风抗原的均相可视化和荧光分析方法，该方法具有高的灵敏度和特异性，颜色可视化读取等优点。

但是其分析灵敏度仅仅能达到pg/mL级别，即分析灵敏度还是相对较低，并且只能实现颜色可视化读取，如何进一步改善分析灵敏度，为今后基层医院和偏远地区破伤风的POCT检测奠定基础成为了本领域技术人员亟待解决的技术问题

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种基于三重并联杂交链式反应的破伤风抗原的均相超灵敏二维可视化和荧光分析方法，以解决现有技术中破伤风抗原的均相可视化和荧光分析方法的分析灵敏度较低，难以为今后基层医院和偏远地区破伤风的POCT检测奠定基础的技术问题。

本发明的目的之二在于提供一种基于三重并联杂交链式反应的破伤风抗原的均相超灵敏二维可视化和荧光分析方法的应用。

为了实现上述目的之一，本发明提供了一种基于三重并联杂交链式反应的破伤风抗原的均相超灵敏二维可视化和荧光分析方法，所述方法包括核酸适配体和破伤风抗原基于三重并联杂交链式反应获得长双链DNA，在抗坏血酸和Cu²⁺存在下，形成DNA模版Cu NPs，监测DNA模版Cu NPs的荧光信号，并基于DNA模版Cu NPs的荧光信号定量单一目标物，所述单一目标物为破伤风抗原。

根据一种优选实施方式，所述DNA模版Cu NPs的激发波长为340nm。

为了实现上述目的之一，本发明还提供了一种基于三重并联杂交链式反应的破伤风抗原的均相超灵敏二维可视化和荧光分析方法，所述方法包括核酸适配体和破伤风抗原基于三重并联杂交链式反应获得长双链DNA，在抗坏血酸和Cu²⁺存在下，形成DNA模版CuNPs，并基于QDs选择性识别Cu²⁺和DNA模版Cu NPs，监测QDs的荧光信号，并基于QDs的荧光信号定量单一目标物，所述单一目标物为破伤风抗原。