[发明专利]一种利用质谱法检测高油酸花生中致敏原的方法

权利要求书

1.一种利用质谱法检测高油酸花生中致敏原的方法，包括以下步骤：

利用质谱平行反应监视法对高油酸花生提取物进行质谱分析，得到蛋白质信息；

将所得蛋白质信息与UniProt数据库中的生物信息学数据进行比对和筛选，得到与花生过敏有关的致敏蛋白；

通过特定的筛选条件筛选出致敏蛋白中的特异性肽段，得到特定致敏原中的特异性肽段；

筛选出特异性肽段的条件包括：1)无任何修饰；2)图谱库中与该段氨基酸序列相吻合的谱图数大于3；3)序列仅在某个或某两个蛋白质中存在；4)氨基酸数目为7～20；5)肽段中不含有半胱氨酸和甲硫氨酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质谱分析的结果使用ProteomeDiscover软件在UniProt/Swiss-prot数据库进行检索。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质谱分析的色谱柱条件为：C-18色谱柱；流速：300μL/min；进样体积2mL；A液：0.1％甲酸水溶液，B液：0.1％甲酸的乙腈溶液，梯度洗脱；

质谱条件：电子源：ESI；扫描方式：PRM；采用正离子模式，离子传输管温度320℃；一级全扫描范围为350～1550m/z；二级扫描AGC设置为5.0e4，离子注入时间IT设为100ms，碰撞能量为32eV。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高油酸花生提取物按照以下方法制得：

将花生剥壳去红衣，粉碎，脱脂，得到脱脂花生粉末；

将所述脱脂花生粉末与缓冲溶液混合，8500～9500rpm下剪切55～65s，再在4℃下磁力搅拌4～4.2h，得到的花生蛋白匀浆离心，收集上清液；

将所述上清液煮沸，上样，用Bio-rad预制胶和垂直电泳槽，恒定电压150V电泳50min，考马斯亮蓝染色后脱色，得到凝胶条带；

切下所述凝胶条带，切碎，用乙腈和碳酸氢铵脱色，二硫苏糖醇还原二硫键，用胰蛋白酶酶解，35℃～40℃下处理10～15h，然后终止酶解反应，所得到肽段用含0.1％的三氟乙酸和50％丙酮溶解液提取多次，将提取的肽段浓缩，再复溶于甲酸溶液中，离心，得到高油酸花生提取物。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述凝胶条带中过敏蛋白的分子量为5kDa～75kDa。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述特异性肽段包括Q9SQH7、B0YIU5、B6CG41、Q647G5、O82580和Q45W87中的一种或多种。