[发明专利]一种基于BCA技术以Au NP为基质的MALDI MS检测DNA/蛋白质的方法

权利要求书

1.一种基于BCA技术以AuNP为基质的MALDI MS检测DNA/蛋白质的方法，其特征在于，所述MALDI MS检测DNA/蛋白质的方法采用硫醇化物为条形码，采用金纳米颗粒为基质，对目标DNA或目标蛋白质进行MALDI MS分析检测。

2.一种基于BCA技术以AuNP为基质的MALDI MS检测DNA/蛋白质的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)双组分寡核苷酸修饰的金纳米颗粒的制备：将3'-硫醇化特异性寡聚物加入到金纳米颗粒中，经过老化过程，再加入硫醇化物分子制得双组分寡核苷酸修饰的金纳米颗粒，即NP探针；

(2)单组分寡核苷酸修饰的磁性颗粒的制备：用DMSO洗涤胺官能化磁性微粒，然后使用异双功能交联剂SMPB与5'-硫醇化寡核苷酸链偶联制得单组分寡核苷酸修饰的磁性颗粒，即MP探针；

(3)三明治夹心复合物的形成：将MP探针、目标靶和NP探针经杂交合成MP-目标物-NP的三明治夹心复合物；

(4)硫醇化物条形码的释放：将灭菌水加入到步骤(3)形成的三明治夹心复合物中，并剧烈震荡25-35min使条形码去杂交，用磁铁固定MP探针，收集硫醇化物条形码；

(5)Au NP基质的制备：将HAuCl₄·3H₂O溶解于四氢呋喃并用冰浴冷却，再加入步骤(4)制得的硫醇化物条形码，低速搅拌至溶液颜色至无色，然后加入NaBH₄搅拌1.5-2.5h、去除沉淀，溶液蒸发浓缩后加入冰水，收集沉淀并用甲醇反复清洗，最后用蒸馏水重新分散即得Au NP基质；

(6)MALDI MS分析硫醇化物间接测定目标蛋白质/DNA：将Au NP作为MALDI测定基质应用于MALDI“平板”，干燥后用三氟乙酸进行洗涤，然后在正离子反射模式下在质谱分析中测定目标。

3.如权利要求2所述的一种基于BCA技术以AuNP为基质的MALDI MS检测DNA/蛋白质的方法，其特征在于，所述步骤(1)和步骤(2)中还包括分别对NP探针和MP探针进行纯化处理。

4.如权利要求2所述的一种基于BCA技术以AuNP为基质的MALDI MS检测DNA/蛋白质的方法，其特征在于，所述步骤(1)中金纳米颗粒通过柠檬酸盐还原HAuCl₄制备而得。

5.如权利要求2所述的一种基于BCA技术以AuNP为基质的MALDI MS检测DNA/蛋白质的方法，其特征在于，所述步骤(1)中金纳米颗粒的粒径为：13-15nm。

6.如权利要求2所述的一种基于BCA技术以Au NP为基质的MALDI MS检测DNA/蛋白质的方法，其特征在于，所述步骤(1)中硫醇化物为丙硫醇。

7.如权利要求2所述的一种基于BCA技术以Au NP为基质的MALDI MS检测DNA/蛋白质的方法，其特征在于，所述步骤(2)中磁性颗粒的粒径为：1-3μm。

8.如权利要求2所述的一种基于BCA技术以Au NP为基质的MALDI MS检测DNA/蛋白质的方法，其特征在于，所述步骤(3)中目标靶为DNA或蛋白质中的一种。

9.如权利要求2所述的一种基于BCA技术以Au NP为基质的MALDI MS检测DNA/蛋白质的方法，其特征在于，所述步骤(4)灭菌水为120℃处理后的蒸馏水。

10.如权利要求2所述的一种基于BCA技术以Au NP为基质的MALDI MS检测DNA/蛋白质的方法，其特征在于，所述步骤(5)中低速搅拌的速度为90-110r/min，搅拌时间为1.5-2.5h。