[发明专利]人前列腺上皮细胞非那雄胺耐药模型的构建方法

权利要求书

1.人前列腺上皮细胞非那雄胺耐药模型的构建方法，包括：将人前列腺上皮细胞RWPE-1以A培养基和B培养基交替培养；

所述A培养基为含有非那雄胺的K-SFM完全培养基，其中非那雄胺的浓度依次为0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μmol/L、8.0μmol/L、16.0μmol/L、32.0μmol/L和64.0μmol/L；

所述B培养基为不含非那雄胺的K-SFM完全培养基；所述K-SFM完全培养基包括K-SFM基础培养液、表皮生长因子5μg/L、牛脑垂体提取物 70mg/L、氢化可的松0.5mg/L、普通胰岛素5mg/L和1%双抗，所述双抗为青霉素和链霉素；

所述培养的接种密度为2万~4万活细胞/cm²；所述培养过程中细胞的密度为4万~7万活细胞/cm²；

所述交替培养中，A培养基培养的时长为40~60h，B培养基培养的时长为48h~72h。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述交替培养中，A培养基培养后在以B培养基培养之前，还包括收集细胞和清洗细胞的步骤。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述收集细胞包括以0.05wt%胰蛋白酶消化、以2wt%FBS终止消化和离心去除胰酶的步骤；

所述清洗细胞采用PBS缓冲液，清洗的次数为3次。

4.根据权利要求1~3任一项所述的构建方法，其特征在于，所述培养的条件为37℃、CO₂体积百分比浓度为5％，饱和湿度。

5.权利要求1~4任一项所述方法构建的非那雄胺耐药人前列腺上皮细胞作为模型在制备前列腺增生性疾病的药物筛选试剂中的应用。