[发明专利]一种具有镇痛活性的PD-1靶向肽、其合成方法及其应用

说明书

本发明属于生物医药技术领域，本发明公开了一种靶向PD‑1的小分子镇痛肽TP‑01，其氨基酸序列为：ISYGGADYK，分子量为973.04g/mol。该小分子多肽可通过经典的Fmoc‑固相合成得的，在PD‑1靶点镇痛药物的研发中发挥重要作用。本发明的优点在于首次通过分子对接技术，以PD‑1为靶点高通量筛选内部肽库，筛选出具有镇痛活性的PD‑1的小分子肽TP‑01。本发明所提供的化合物能够显著性抑制高K+溶液诱导的钙离子内流；此外，在小鼠疼痛模型中表现出很好的镇痛活性，能够有效缓解炎症痛及内脏痛，从而填补了PD‑1为靶点的镇痛肽类药物的研究空白，为基于PD‑1镇痛药物的研究和开发提供了新的思路以及理论依据。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种具有镇痛活性的PD-1靶向肽、其合成方法及其应用。

背景技术

疼痛是一种重要的生理现象，它能够提醒机体已经出现或潜在的组织损伤，也是许多临床疾病的常见症状。慢性痛是一种全球性的健康问题，在世界范围内的发病率高达1/3，每年用于治疗慢性疼痛的费用高达60000多亿美元，不仅降低了患者的生活质量，而且造成严重的经济和社会问题(Pain.2019，160，53–59)。

当前针对慢性疼痛的治疗以抗癫痫药、抗抑郁药、阿片类药物(如吗啡)、辣椒素、肉毒杆菌和非甾体抗炎药物(如阿司匹林)等药物治疗为主。但这些药物的治疗效果有限，且伴随药物耐受、药物依赖、呼吸抑制、胃肠道功能抑制、以及痛觉过敏等不良反应。开发安全有效的治疗慢性疼痛的药物的需求日益迫切。

程序性死亡受体(PD-1)/程序性死亡配体(PD-L1)通路最早在人类的癌症治疗中发现，在肿瘤的微环境中，活化的T细胞高水平的表达PD-1，通过干扰素γ(IFN-γ)、白介素(ILs)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等细胞因子的释放，能够诱导PD-L1在局部组织中的表达，上调的PD-1通过结合T细胞上的PD-1后，阻止T细胞的过度兴奋，维持免疫系统对自身抗原的耐受，并降低对正常组织的免疫反应(Immunity.2018，48，434–452)。通过阻断恶性肿瘤和免疫T细胞间PD-1/PD-L1的相互作用，可以逆转免疫抑制状态，提高机体免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤能力。因此，免疫检查点PD-1/PD-L1通路，作为恶性肿瘤的治疗靶点，在免疫治疗领域脱颖而出。2014年，首个PD-1单克隆抗体药物纳武单抗被批准用于治疗黑色素瘤。

最新研究发现PD-1和在中枢和外周神经系统中广泛表达，参与疼痛的调控。PD-L1通过激活PD-1，诱发SHP-1磷酸化，抑制钠通道，活化钾通道，进而抑制疼痛信号的传递。足底皮下注射PD-L1能够显著缓解急性痛和慢性痛，具有很好的应用前景及安全性(Nat.Neurosci.2017，20，917-926)。因此，寻找具有镇痛活性的PD-1为靶点的多肽配体，为开发新型镇痛药物提供新的思路。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在问题或不足，本发明提供一种具有镇痛活性的PD-1靶向肽、其合成方法及其应用。

为实现上述发明目的，本发明的实施例提供一种具有镇痛活性的PD-1靶向肽，其特征在于，所述PD-1靶向肽为小分子多肽TP-01，其能够特异性的结合于PD-1的IgV区，其氨基酸序列为：ISYGGADYK，即Ile-Ser-Tyr-Gly-Gly-Ala-Asp-Tyr-Lys，分子量为973.04g/mol。

本发明的实施例还一种具有镇痛活性的PD-1靶向肽的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)选取经过二氯甲烷溶胀处理后的wang-树脂作为多肽合成载体；

(2)20％六氢吡啶的N，N-二甲基甲酰胺混合溶液作为9-芴甲氧羰基的脱除试剂；

(3)N，N-二异丙基乙胺/1-羟基苯并三唑/O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐作为多肽合成的缩合试剂，所用量为树脂物质的量的3～6倍；