[发明专利]一种沼液微生物DNA的提取试剂盒及提取方法

权利要求书

1.一种沼液微生物DNA的提取试剂盒，包括裂解缓冲液、副裂解缓冲液、杂质沉淀液、DNA结合液，其特征在于，所述裂解缓冲液包含50～100mmol/L Tris-HCl，50～100mmol/LNaCl，25～50mmol/L EDTA，1％～2％PVP 40，pH 7.0～8.0；所述副裂解缓冲液包含10％～20％SDS；所述杂质沉淀液包含2～2.5mol/LKAC，pH 5.0～6.0；所述DNA结合液包含5～6mol/L异硫氰酸胍和50～100mmol/L Tris-HCl，pH 5.5～6.5。

2.根据权利要求1所述的提取试剂盒，其特征在于，所述提取试剂盒还包括漂洗缓冲液，所述漂洗缓冲液包含10～20mmol/L Tris-HCl，pH 7.0～8.0，80～100mmol/L NaCl，体积浓度70％～80％乙醇。

3.根据权利要求1所述的提取试剂盒，其特征在于，所述提取试剂盒还包括DNA洗脱液，所述DNA洗脱液包含5～10mmol/L Tris-HCl，pH 7.5～8.5。

4.权利要求1～3所述任意一项提取试剂盒在沼液微生物DNA提取中的应用。

5.一种沼液微生物DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

利用细胞筛网对沼液进行过滤，富集沼液微生物，再使用权利要求1～3任意一项所述提取试剂盒提取所述富集沼液微生物的基因组DNA。

6.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述细胞筛网的孔径为100μm。

7.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述使用提取试剂盒提取富集沼液微生物的基因组DNA，包括富集的沼液微生物依次经所述裂解缓冲液和所述副裂解缓冲液处理后离心，所得上清液与所述杂质沉淀液混合沉淀，离心得到的上清液与所述DNA结合液混合，将混合液加入DNA吸附柱中离心吸附，完毕后进行漂洗和洗脱得到沼液微生物DNA。

8.根据权利要求7所述的提取方法，其特征在于，所述沼液微生物与所述裂解缓冲液混合后，加入RNaseA静置裂解，再加入所述副裂解缓冲液下温育裂解，离心得上清液。

9.根据权利要求7所述的提取方法，其特征在于，所述杂质沉淀液与裂解离心上清液混合，冰浴沉淀。

10.根据权利要求7所述的提取方法，其特征在于，所述DNA吸附柱用所述漂洗缓冲液漂洗，将所述DNA洗脱液预热后对漂洗后的DNA吸附柱进行洗脱，离心得到沼液微生物DNA。