[发明专利]用贻贝制备牛磺酸的方法

权利要求书

1.用贻贝制备牛磺酸的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：

(1)冷冻干燥：将贻贝冷冻干燥；

(2)研磨、过筛：将步骤1中的冻干贻贝制成贻贝粉、过筛；

(3)提取：取一定量贻贝粉，加入纯化水，加热提取，冷却至室温，过滤，浓缩，得浓缩液；

(4)除蛋白：去除浓缩液中酸性蛋白和碱性蛋白，取上清液；

(5)纯化：取适量经步骤4得到的浓缩提取液，过柱纯化，得洗脱液；

(6)浓缩：将收集到的洗脱液进行浓缩；

(7)重结晶：在浓缩洗脱液中加入无水乙醇，冷藏，析出粗品牛磺酸，粗品牛磺酸加适量水溶解，再加入无水乙醇，得到牛磺酸晶体。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)冷冻干燥：取新鲜贻贝数只，将肉挖出，称重，放入-20℃冰箱冷冻4小时或者放入液氮中1-3分钟，取出后放入已经预冷的冷冻干燥机，干燥后取出。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)除蛋白：在浓缩液中缓慢加入6mol/L盐酸溶液，调节pH至3.00，离心去除酸性蛋白，取上清液；在上清液中缓慢加入5mol/LNaOH，调节pH至10.00，离心去除碱性蛋白，取上清液；上清液再次用6mol/L盐酸溶液调节pH至4.00，离心去除酸性蛋白。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)纯化：取适量浓缩提取液，使其经过强酸性阳离子交换树脂，用超纯水洗脱，试管收集洗脱液，每管约10mL，对收集到的洗脱液进行电导率测定，记录流出液的电导率的变化，并收集电导率从开始下降至稳定期间的洗脱液，即为牛磺酸含量较高的洗脱液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：

(1)冷冻干燥：取新鲜贻贝数只，将肉挖出，称重，放入-20℃冰箱冷冻4小时或者放入液氮中1-3分钟，取出后放入已经预冷的冷冻干燥机，干燥后取出。

(2)研磨、过筛：将冷冻干燥后的贻贝肉用小型万能粉碎机粉碎，得冻干贻贝粉，经筛网过筛。

(3)提取：加入纯化水，置于恒温水浴锅中，加热提取，冷却至室温，用4层纱布进行过滤，滤液浓缩至其体积的约1/6倍。

(4)除蛋白：在浓缩液中缓慢加入6mol/L盐酸溶液，调节pH至3.00，离心去除酸性蛋白，取上清液；在上清液中缓慢加入5mol/LNaOH，调节pH至10.00，离心去除碱性蛋白，取上清液；上清液再次用6mol/L盐酸溶液调节pH至4.00，离心去除酸性蛋白。

(5)纯化：取适量浓缩提取液，使其经过强酸性阳离子交换树脂，用超纯水洗脱，试管收集洗脱液，每管约10mL，对收集到的洗脱液进行电导率测定，记录流出液的电导率的变化，并收集电导率从开始下降至稳定期间的洗脱液，即为牛磺酸含量较高的洗脱液。

(6)浓缩：将收集到的洗脱液用旋转蒸发仪进行浓缩，至原体积的1/10。

(7)重结晶：在浓缩洗脱液中加入无水乙醇，放入4℃冰箱，即可析出粗品牛磺酸，粗品牛磺酸加适量水溶解，再加入无水乙醇，反复多次可得到纯度较高的牛磺酸晶体。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)中过筛目数为80目。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(3)中加入纯化水的料液比为1:20，水浴温度为60℃，加热提取时间为2h。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，三次离心转速均为5000rpm，时间均为15min。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(5)中，洗脱速度为5mL/min，。

10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(7)中，浓缩液与无水乙醇的体积比为1:3，在冰箱中的放置时间为12h。