[发明专利]一种利用花魔芋胚珠培养获得单倍体的方法

权利要求书

1.一种利用花魔芋胚珠培养获得单倍体的方法，其特征在于，包括以下步骤，

S1：从花魔芋植株上获取未授粉的魔芋雌花段；

S2：将花魔芋雌花段进行低温预处理以及外植体消毒；

S3：从消毒后的雌花段花梗上剥离出子房，进行预培养；

S4：待子房膨大，子房壁裂开，部分出现愈伤组织后，在无菌条件下解剖子房，取出胚珠，进行胚珠愈伤组织诱导培养；

S5：待愈伤组织膨大到直径为2cm以上时，将诱导的愈伤组织接种于分化培养基中，进行胚珠愈伤组织分化培养；

S6：将胚珠愈伤组织分化得到的芽转入1/2MS基础培养基、浓度为0.5mg•L^-1的NAA、30g•L^-1蔗糖，5g•L^-1琼脂，2g•L^-1活性炭的培养基中，进行不定芽生根培养，获得完整的单倍体植株，所述MS基础培养基的pH为5.8；

步骤S2的具体操作包括以下步骤，

S201：将花魔芋的雌花段置于4°C冰箱预处理2天；

S202：将整个的雌花段在自来水下冲洗10-20min，再用75%酒精浸泡30-50s；所述雌花段包括花梗和子房；

S203：将酒精浸泡后的雌花段再用次氯酸钠浸泡8-10min；

S204：将次氯酸钠浸泡消毒后的雌花段使用无菌水冲洗3-5次后，无菌滤纸吸干备用；

步骤S3的具体操作包括以下步骤，

S301：从消毒后的雌花段花梗上剥离出子房；

S302：切弃子房上的柱头部分，将剩余部分接种于无激素添加的MS基础培养基中培养10-15天；

所述MS基础培养基中有蔗糖35g/L，琼脂5g/L；

培养条件为：光照强度2000-30001ux，光照时间16h/d，温度28±1℃；

步骤S4的具体操作包括以下步骤，

S401：待子房膨大，子房壁由浅绿色变为深绿色，子房壁裂开，部分出现愈伤组织后，在无菌条件下解剖子房，去掉子房壁，取出胚珠；

S402：将胚珠接种于愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养；所述愈伤组织诱导培养基为MS基础培养基、1.0mg•L^-1的NAA、1.0 mg•L^-1的6-BA、35g•L^-1的蔗糖和5g•L^-1的琼脂，且所述愈伤组织诱导培养基的pH为5.8；培养条件为先暗培10-15d后，再光照培养，光照强度2000-30001ux，光照时间14 h/d，温度26±1℃；

步骤S5中所述的分化培养基为MS基础培养基、浓度为0.5 mg•L^-1的NAA、浓度为2.0mg•L^-1的6-BA、30g•L^-1的蔗糖和7g•L^-1的琼脂；且所述分化培养基的pH为5.8；

胚珠愈伤组织分化培养的培养条件为：光照强度4000-50001ux，光照16h/d，温度26±1℃，培养时间30~40d。

2.根据权利要求1所述的一种利用花魔芋胚珠培养获得单倍体的方法，其特征在于，步骤S1的具体操作包括以下步骤，

S101：在花魔芋佛焰苞打开后，附属器发出“腐尸味”，花药未散粉，用75%的酒精对剪刀进行消毒处理，剪掉雄花段和佛焰苞；

S102：在伤口处涂抹植物伤口愈合剂，保留雌花段，并套袋防止虫媒传粉；

S103：待雌花上子房由白色转为浅绿色时，剪掉整个雌花段待用。

3.根据权利要求2所述的一种利用花魔芋胚珠培养获得单倍体的方法，其特征在于，步骤S102中所述的植物伤口愈合剂包括甲基硫菌灵。