[发明专利]一种利用花魔芋胚珠培养获得单倍体的方法

说明书

本发明公开了一种利用花魔芋胚珠培养获得单倍体的方法，其特征在于，S1：从花魔芋植株上获取未授粉的魔芋雌花段；S2：将花魔芋雌花段进行低温预处理以及外植体消毒；S3：从消毒后的雌花段花梗上剥离出子房，进行预培养；S4：待子房膨大，子房壁裂开，部分出现愈伤组织后，在无菌条件下解剖子房，取出胚珠，进行胚珠愈伤组织诱导培养；S5：待愈伤组织膨大到直径为2cm以上时，将诱导的愈伤组织接种于分化培养基中，进行胚珠愈伤组织分化培养；S6：将胚珠愈伤组织分化得到的芽进行生根培养，获得完整的单倍体植株。本发明利用花魔芋未授粉子房胚珠培养获得单倍体，建立了一套花魔芋胚珠培养再生体系，为花魔芋单倍体育种提供新的技术平台。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种利用花魔芋胚珠培养获得单倍体的方法。

背景技术

魔芋为天南星科多年生草本植物，内含大量可溶性膳食纤维葡甘聚糖，是人体第七大营养素，为联合国确定的十大保健食品，对降三高、减肥、通便等具有显著效果。魔芋在我国主要分布于四川、云南、陕西、宁夏、甘肃等地，且以花魔芋分布最为广泛，为主要的栽培种，遍布于秦岭以南的所有山区和丘陵地带。

魔芋具高度杂合，遗传背景复杂，因而难以通过传统方法得到纯合自交系。通过花药或未授粉胚珠培养诱导单倍体则可在加倍后获得纯系，可缩短育种年限，提高育种效率。此外，单倍体能够表达隐性性状，可快速筛选有用基因型，提高选择效率。然而，利用魔芋花药或未授粉胚珠培养未见相关研究报道，导致魔芋单倍体育种的应用受到极大的限制。

发明内容

针对上述存在的问题，本发明旨在提供一种利用花魔芋胚珠培养获得单倍体的方法，利用花魔芋未授粉子房胚珠培养获得单倍体，建立了一套花魔芋胚珠培养再生体系，为花魔芋单倍体育种提供新的技术平台。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：

一种利用花魔芋胚珠培养获得单倍体的方法，其特征在于，包括以下步骤，

S1：从花魔芋植株上获取未授粉的魔芋雌花段；

S2：将花魔芋雌花段进行低温预处理以及外植体消毒；

S3：从消毒后的雌花段花梗上剥离出子房，进行预培养；

S4：待子房膨大，子房壁裂开，部分出现愈伤组织后，在无菌条件下解剖子房，取出胚珠，进行胚珠愈伤组织诱导培养；

S5：待愈伤组织膨大到直径为2cm以上时，将诱导的愈伤组织接种于分化培养基中，进行胚珠愈伤组织分化培养；

S6：将胚珠愈伤组织分化得到的芽进行生根培养，获得完整的单倍体植株。

进一步的，步骤S1的具体操作包括以下步骤，

S101：在花魔芋佛焰苞打开后，附属器发出“腐尸味”，花药未散粉，用75％的酒精对剪刀进行消毒处理，剪掉雄花段和佛焰苞；

S102：在伤口处涂抹植物伤口愈合剂，保留雌花段，并套袋防止虫媒传粉；

S103：待雌花上子房由白色转为浅绿色时，剪掉整个雌花段待用。

进一步的，步骤S102中所述的植物伤口愈合剂包括甲基硫菌灵。

进一步的，步骤S2的具体操作包括以下步骤，

S201：将花魔芋的雌花段置于4℃冰箱预处理2天；

S202：将整个的雌花段在自来水下冲洗10-20min，再用75％酒精浸泡30-50s；所述雌花段包括花梗和子房；

S203：将酒精浸泡后的雌花段再用次氯酸钠浸泡8-10min；

S204：将次氯酸钠浸泡消毒后的雌花段使用无菌水冲洗3-5次后，无菌滤纸吸干备用。