[发明专利]一种基于g-C3

权利要求书

1.一种基于多孔g-C₃N₄-CoPdNPs和Fe MOFs-sCuO之间的共振能量转移检测神经烯醇化酶的电化学发光传感器的制备及应用，其特征在于，包括以下步骤：

（1）用Al₂O₃抛光粉打磨直径为4 mm的玻碳电极，超纯水清洗干净，将6 µL、0.5~3 mgmL^-1 的多孔g-C₃N₄-CoPdNPs-Ab₁标记物溶液滴加到电极表面，室温下晾干成膜；

（2）滴加3 µL、质量分数为0.1%的BSA溶液到电极表面，用超纯水洗净，室温下晾干；

（3）滴加6 µL、0.00005~100 ng mL^-1的一系列不同浓度的神经烯醇化酶抗原到电极表面，孵化2 h，超纯水冲洗，室温下晾干；

（4）滴加6 µL的Fe MOFs负载小尺寸CuO（Fe MOFs-sCuO）的神经烯醇化酶识别抗体的二抗标记物Fe MOFs-sCuO-Ab₂溶液，超纯水冲洗，室温下晾干，制得一种电化学发光传感器。

2.如权利要求1所述的一种基于多孔g-C₃N₄-CoPdNPs和Fe MOFs-sCuO之间的共振能量转移检测神经烯醇化酶的电化学发光传感器的制备及应用，其特征在于，所述的CoPd合金纳米粒子修饰的多孔g-C₃N₄复合材料g-C₃N₄-CoPdNPs并结合神经烯醇化酶识别抗体的一抗标记物多孔g-C₃N₄-CoPdNPs-Ab₁溶液的制备步骤如下：

（1）多孔g-C₃N₄的制备

以三聚氰胺为原料，以粒径为10 nm的SiO₂球为模板，通过热缩聚法制备了具有多孔结构的g-C₃N₄，先将2 g三聚氰胺和1 g SiO₂球研磨混合均匀，然后将混合物转移到带盖的坩埚中，在550 ℃下以5 ℃ min⁻¹的升温速度加热4 h，得到具有核壳结构的g-C₃N₄@SiO₂，接着将g-C₃N₄@SiO₂加入到30 mL 10% 的HF水溶液中浸泡6 h，水洗几次后去除SiO₂，得到多孔g-C₃N₄；

（2）CoPd合金纳米粒子修饰的多孔g-C₃N₄复合材料g-C₃N₄-CoPdNPs的制备

在18 mL油胺中溶解0.35 mmoL的乙酰丙酮钴和0.30 mmoL的二溴化钯，然后将混合物搅拌，在氮气气氛下加热到60 ℃，然后加入0.5 mL的三正辛基膦，混合物的颜色由粉红色变为深绿色，将溶液以5 ℃ min^-1的速度加热到260°C，并在此温度下保持2 h，随后，将溶液冷却到室温，加入40 mL乙醇，离心得到CoPdNPs，此外，将250 mg的多孔g-C₃N₄溶于20 mL乙醇中，将前面制备好的CoPdNPs分散液超声后与多孔g-C₃N₄混合搅拌过夜，最后在7000 rmin^-1下离心，乙醇洗涤数次，分散在10 mL乙醇中，4℃保存备用；

（3）多孔g-C₃N₄-CoPdNPs结合神经烯醇化酶识别抗体的一抗标记物多孔g-C₃N₄-CoPdNPs-Ab₁溶液的制备

将10 µg mL^-1的神经烯醇化酶捕获抗体的一抗标记物在4℃下使用EDC、NHS进行活化，然后与多孔g-C₃N₄-CoPdNPs共同孵化6 h，得到一抗标记物多孔g-C₃N₄-CoPdNPs-Ab₁溶液。