[发明专利]用于鉴别肺结节良恶性的血浆外泌体自身抗体组合及应用

说明书

本发明属于生物和医学技术领域，公开了一种用于鉴别良恶性肺结节的血浆外泌体自身抗体组合及应用，所述用于鉴别肺结节良恶性的血浆外泌体自身抗体组合包括：P53、PGP9、SOX2、GAGE7、GBU4‑5、MAGE和CAGE；所述肺结节良恶性抗体表达的鉴别方法包括：外周血的血浆和血清分离；外泌体的提取；外泌体的鉴定；肺癌自身抗体的检测；比较血清自身抗体与血浆外泌体自身抗体鉴别良恶性肺结节的诊断能力。本发明很好地弥补了缺乏诊断肺结节良恶性标志物的现状，与传统生物标志物相比，大大提高了疾病诊断的敏感性和特异性，具有广阔的市场应用前景。同时，本发明简单快速、经济实用且便于临床开展，具有深远的临床意义和推广性。

技术领域

本发明属于生物和医学技术领域，尤其涉及一种用于鉴别肺结节良恶性的血浆外泌体自身抗体组合及应用。

背景技术

目前，肺癌是我国发病率和死亡率均排名第一位的恶性肿瘤。近年来，随着靶向治疗和细胞免疫治疗的使用，肺癌治疗效果取得了一定进展，但目前我国肺癌患者5年生存率仍不足15％。统计结果显示，当肺癌发现于早期(I-II期)时，五年生存率大于50％，如果肺癌发现于晚期或者已发生转移，五年生存率则只有5％；而现实中只有16％的肺癌患者能在早期被发现。因此，肺癌早期筛查的开展和应用推广具有非常重要的意义。早期肺癌表现通常为肺结节，但肺结节既包含良性肿瘤也包含恶性肿瘤，所以对肺结节良恶性抗体表达的鉴别，对于肺癌早期发现具有非常重要的意义。目前肺结节良恶性鉴别诊断，主要依靠肿瘤标志物(包括癌胚抗原、糖类抗原125、鳞状细胞抗原、神经元特异性烯醇化酶、胃泌素释放肽前体和细胞角蛋白21-1)、低剂量CT(Low-Dose Computed Tomography，LDCT)检查及组织病理活检等。然而这些方法仍然存在一些问题，目前肿瘤标志物单独检测恶性结节的临床敏感性太低，无法满足临床需要；采用胸部低剂量CT对高危人群进行筛查可使肺癌的病死率下降20％，但低剂量螺旋CT仅可识别肺结节，但对肺结节良恶性鉴别诊断敏感性比较低，即高达96.4％的假阳性率，这给患者带来一些困扰。因此探索肺结节良恶性诊断的新方法具有重要的临床意义。

在肿瘤发生发展过程中，肿瘤细胞内表达异常的蛋白可刺激机体免疫系统产生抗体，这些抗体称之为肿瘤自身抗体。人体免疫系统如同一个有效的生物信号放大系统，只要存在微量的肿瘤抗原，通过持续的诱导，就可以在血清中检测到相应的抗体，且抗体可以在外周血中长期、稳定的存在。自身抗体的产生可能先于疾病症状，持续数月或数年。因此，循环中肿瘤相关自身抗体的检测或是癌症早期检测的可行方法。1966年，美国科学家Baldwin发现在癌症发展的极早期阶段，人体免疫系统可以产生针对肿瘤细胞的特异性自身抗体。随后，分别在1970年和1995年，科学家Taylor和Wasserman研究团队最早发现了乳腺癌自身抗体和肺癌自身抗体。2015年，肺癌血清七种自身抗体诊断试剂盒(P53、MAGEA1、SOX2、GBU4-5、PGP9.5、CAGE和GAGE7自身抗体)在中国上市。

虽然肺癌七种自身抗体在肺癌早期诊断的敏感性显著优于传统血清学肿瘤标志物(CEA、CA211、SCC、NSE和ProGRP)。但自身抗体检测在肺癌诊断中具有一定的局限性，(1)敏感性较低，不是所有肺癌患者都能检测到相应的自身抗体，特别是单一自身抗体敏感性较低，联合检测敏感性也只有50-60％；(2)准确度不高，阳性结果具有辅助诊断价值，阴性结果却不能排除肺癌；(3)特异性不足，不是所有阳性抗体均能诊断肺癌。(4)目前关于肺癌自身抗体在肿瘤免疫反应中的作用机制有待进一步阐明。