[发明专利]一种脂多糖介导肝损伤重症化动物模型的构建方法

权利要求书

1.一种脂多糖介导肝损伤重症化动物模型的构建方法，其特征在于，所述脂多糖介导肝损伤重症化动物模型的构建方法包括：

1)建立急性肝损伤小鼠模型；急性肝损伤小鼠模型分为对照组、四氯化碳组；分别腹腔注射生理盐水、四氯化碳诱导小鼠24h；

2)低剂量脂多糖筛选，脂多糖剂量要求在不引起肝损伤条件下进行小鼠诱导，即脂多糖不引起肝损伤；

3)低剂量脂多糖后干预急性肝损伤模型小鼠，评估肝损伤；用生理盐水腹腔注射小鼠为对照组、四氯化碳组、脂多糖组、四氯化碳+脂多糖组；通过统计实验小鼠死亡率、测肝功能、测量肝组织坏死面积综合评估肝损伤，确定成功构建内毒素血症介导肝损伤重症化的动物模型；

分子机制评估，通过Westem Blot检测促肝生长因子受体c-Met、cyclingD1、PCNA，内质网应激相关蛋白GRP78、ATF4、caspase-12，肝细胞核因子HNF1α、HNF4α的表达情况，确定成功建立肝损伤重症化的机制评估体系。

2.如权利要求1所述脂多糖介导肝损伤重症化动物模型的构建方法，其特征在于，所述建立急性肝损伤小鼠模型及低剂量脂多糖介导肝损伤重症化小鼠模型构建方法包括步骤如下：

1)将脂多糖加入生理盐水中，充分混匀使其溶解，溶液体积比为1mg：5ml；

2)用注射器抽取2ml四氯化碳加入准备好的15ml离心管中，再用注射器抽取8ml橄榄油用0.22um一次性过滤器过滤除菌，加入到15ml去酶管，摇匀。

3.如权利要求2所述脂多糖介导肝损伤重症化动物模型的构建方法，其特征在于，脂多糖使用浓度为0.2g/L，脂多糖可使在原有基础肝病的小鼠再次加重肝损伤即肝损伤重症化。

4.如权利要求2所述脂多糖介导肝损伤重症化动物模型的构建方法，其特征在于，所配脂多糖溶液用量为0.5mg/kg、所述的脂多糖的配制方法为称取10mg脂多糖，加入50ml生理盐水中，充分摇匀使其溶解。

5.如权利要求2所述脂多糖介导肝损伤重症化动物模型的构建方法，其特征在于，所配四氯化碳溶液，配比为四氯化碳：橄榄油＝1：4。

6.如权利要求1或2所述脂多糖介导肝损伤重症化动物模型的构建方法，其特征在于，所述1.2)，2.1)，2.2)中，药物配置方法：称取10mg脂多糖，加入50ml生理盐水中，充分摇匀使其溶解；用注射器抽取2ml四氯化碳加入准备好的15ml去酶离心管中，再用注射器抽取8ml橄榄油用0.22um一次性过滤器过滤除菌，加入到15ml去酶管，充分摇匀。

7.如权利要求1所述脂多糖介导肝损伤重症化动物模型的构建方法，其特征在于，所述3)中，对照组、四氯化碳组、脂多糖组分别腹腔注射生理盐水、四氯化碳脂多糖诱导24h后处理小鼠，四氯化碳+脂多糖组腹腔注射四氯化碳预处理6h后再腹腔注射脂多糖诱导24h后处理小鼠。

8.如权利要求1所述脂多糖介导肝损伤重症化动物模型的构建方法，其特征在于，所述步骤四中，分子机制评估具体过程为：采用Westem Blot检测促肝生长因子受体c-Met、cyclingD1、PCNA，内质网应激相关蛋白GRP78、ATF4、caspase-12，肝细胞核因子HNF1α、HNF4α，细胞凋亡cleaved caspase-3的表达情况。

9.如权利要求9所述脂多糖介导肝损伤重症化动物模型的构建方法，其特征在于，所述未折叠蛋白反应是介导内质网应激的重要环节，激活细胞凋亡信号通路，激活转录因子ATF4是内质网启动的标志，使其葡萄糖调节蛋白GRP78未折叠蛋白反应增强，促进细胞内稳态恢复，若持续或过强的内质网应激将激活内质网应激凋亡相关信号caspase-12，进而激活cleaved caspase-3，引起细胞凋亡。