[发明专利]一种脂多糖介导肝损伤重症化动物模型的构建方法

说明书

本发明属于动物模型构建技术领域，公开了一种脂多糖介导肝损伤重症化的运用及动物模型的构建方法。分为：(1)通过不同剂量四氯化碳建立小鼠肝损伤重症化的小鼠模型。(2)不同剂量脂多糖诱导肝损伤及确定不引起正常生理条件下小鼠肝损伤的临界剂量确定(小于0.5mg/kg；对照模型)。(3)0.1mg/kg脂多糖介导四氯化碳诱导小鼠肝损伤重症化的模型的构建及肝损伤重症化评估体系。方法：用四氯化碳诱导小鼠24h，以溶剂橄榄油对照；用脂多糖后诱导小鼠，以PBS对照；通过0.1mg/kg干预1ml/kg四氯化碳诱导的模型小鼠。本发明为研究脂多糖介导动物模型肝损伤重症化的应用及相关机制奠定实验基础。

技术领域

本发明属于动物模型构建技术领域，尤其涉及一种低剂量脂多糖介导肝损伤重症化动物模型的构建方法。

背景技术

目前，肝脏是体内最大的生物代谢器官，由于解剖位置和功能的特殊性，是外源性物质、病毒、内源性代谢产物及多种疾病常侵袭的靶器官，导致肝脏细胞受到破坏，引起肝脏功能异常，即肝损伤。肝细胞是维持肝脏功能和形态的主要细胞，具有再生能力，在一定程度内的肝脏损害是可以恢复的。肝损伤重症化是大量肝细胞坏死，造成肝严重代谢异常及毒素性物质淤积。肝细胞损伤是各种肝脏病变的共同病理生理基础，是肝功能损害的主要原因。肝细胞不可逆性损伤将导致肝细胞死亡，反复活动性肝细胞损伤可加速重症化进展，肝细胞可表现为多种形式，例如肝细胞坏死、凋亡、程序性坏死及自噬等多种形式。引起肝细胞持续性坏死的因素有很多，在临床中发现感染的患者在使用抗生素体温恢复后停用抗生素，发现病人又出现之前的发热表现，故用脂多糖和四氯化碳模拟临床建立内毒素介导肝损伤重症化动物模型，通过探讨影响肝细胞持续性坏死的因素来建立肝损伤重症化的模型。

用于肝损伤小鼠模型的药物有四氯化碳、衣霉素、油酸、硬脂酸、棕榈酸等，脂多糖是革兰氏阴性细菌细胞壁外壁的组成成分，由多糖O抗原、核心多糖和类脂A组成。肠道是革兰氏阴性杆菌最丰富的场所，在细菌繁殖过程、细菌死亡或裂解时才会释放脂多糖，所产生的脂多糖经吸收首先到达肝脏。但脂多糖在没有原发基础病的情况下对肝脏只有轻微影响，该影响肝细胞再生能力可以调节，在原发病的基础上可加重肝损伤。故这次主要选用脂多糖为肝损伤重症化动物模型的介导剂，进一步探讨动物模型的建立与其分子机制评估。本发明在介导模型动物肝损伤重症化中的应用及机制评估体系构建，部分解决现有难以用动物复制临床肝损伤重症化特点及机制评估的难题。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有技术难以用动物复制临床肝损伤重症化特点及机制评估。

解决以上问题及缺陷的难度为：临床上观察到很多不同年龄段的患者；细菌类毒素感染导致肝脏重症化。

解决以上问题及缺陷的意义为：通过选取不同周龄的小鼠，可以模拟临床上观察到不同年龄阶段的患者，并采用类毒素干预，可以模拟临床上患者内毒素血症加重肝脏重症化的过程，对此给予有效的治疗方案

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种脂多糖介导肝损伤重症化动物模型的构建方法。本发明通过用四氯化碳造成小鼠急性肝损伤，再用微量脂多糖后干预。使微量脂多糖(正常情况下对机体不产生或产生对机体微小影响，该影响对实验不产生影响故可忽略)在原有基础疾病上使肝损伤加重导致重症化甚至加重肝衰竭，要求简便、效果稳定、重复性好。

本发明是这样实现的，一种脂多糖介导肝损伤重症化动物模型的构建方法，所述脂多糖介导肝损伤重症化动物模型的构建方法，包括：

步骤一，建立急性肝损伤小鼠模型；其小鼠模型分组为对照组、四氯化碳组诱导小鼠24h后处理小鼠；

积极作用:预实验，用CCl₄诱导急性肝损伤。

步骤二，低剂量脂多糖筛选，脂多糖剂量要求在不引起肝损伤条件下进行小鼠诱导，即微量脂多糖不引起肝损伤；

积极作用:明确脂多糖诱导肝重症化的剂量，建立微量脂多糖诱导肝损伤重症化奠定基础，避免后续建模不成功。