[发明专利]一种抗原谱拓展O型口蹄疫病毒株及其构建方法和应用

说明书

本发明提供了一种抗原谱拓展O型口蹄疫病毒株及其构建方法和应用，属于兽药生物制品技术领域。rHN/NXVP1/G‑H是以重组病毒rHN/NXVP1为骨架，嵌合了O/HB/HK/99的G‑H环抗原表位基因；所述重组病毒在O/HN/CHA/93基础上嵌合了O/NXYCh/CHA/2018的VP1基因所得。O/HN/CHA/93和rHN/NXVP1与Cathay谱系病毒抗原不匹配，而rHN/NXVP1/G‑H能与PanAsia、Mya98和Ind‑2001谱系病毒抗原高度匹配，也能与Cathay谱系病毒抗原匹配，G‑H环的替换拓展了口蹄疫病毒的抗原谱，制备灭活疫苗可用于防控O型多谱系FMDV的流行。

技术领域

本发明属于兽药生物制品技术领域，具体涉及一种抗原谱拓展O型口蹄疫病毒株及其构建方法和应用。

背景技术

口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-MouthDisease Virus，FMDV)引起猪、牛、羊等主要家畜和野生偶蹄动物感染的一种烈性传染病。该病传播迅速、发病率高，危害巨大，因此国际兽疫局(OIE)将其列为必报疫病之首，我国规定为一类动物传染病。FMDV存在A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2和SAT37个血清型，型间无交叉保护，型内交叉保护有差异。近年来，O型FMD依然严重危害我国畜牧养殖业的发展。目前引发我国O型FMD的病毒主要为三个拓扑型(ME-SA、SEA和Cathay拓扑型)中的四个谱系(Mya-98谱系(SEA)、Cathay谱系、PanAsia谱系(ME-SA)和Ind-2001谱系(ME-SA))病毒株。当前FMD多毒株的混合流行加剧了病毒的变异，导致新变异毒株不断出现，使现用疫苗与流行毒株的抗原匹配性下降或抗原不匹配，而导致疫苗的免疫失败，迫切需要筛选与当前所有O型流行毒株抗原匹配的疫苗候选株，用于我国当前FMD的防控。

FMDV粒子结构蛋白VP1、VP2和VP3上含5个由线性或构象性的抗原表位组成的抗原位点，它们是诱导机体产生保护性抗体的主要免疫原。其中抗原位点1的G-H环是诱导机体产生中和抗体最重要的抗原表位，在疫苗免疫保护方面发挥着非常重要的作用。因此，结构蛋白VP1上的G-H环一直是FMD表位疫苗、合成肽疫苗等研究的热门靶点。另外，FMDV在免疫压力下基因高度易变，尤其是结构蛋白VP1上的G-H环，经常表现遗传多样性，其上一个或几个氨基酸的突变常引起病毒抗原的变异，从而直接影响型内不同谱系病毒株之间交叉免疫保护。

大量的研究表明，不同血清型、亚型的RNA病毒之间无交叉反应性，但通过反向遗传技术，替换它们免疫优势的表位，可以提高病毒间的交叉反应性和疫苗的交叉保护能力，能够拓展疫苗的抗原谱。如Rieder E等在A12FMDV感染性克隆的骨架上，构架了嵌合了O型或C型G-H环的重组FMDV，该病毒疫苗的豚鼠抗血清，能同时中和A型和O型或A型和C型FMDV，而嵌合C型G-H环A12 FMDV疫苗免疫猪也能产生抗C型FMDV的交叉中和抗体，能完全保护猪免遭A型FMDV的攻击，部分保护猪免遭C型FMDV的攻击。Jitendra KB等研究也发现，嵌合Asia1型FMDV G-H环保守表位¹⁴³GDLAVLAQR¹⁵¹的重组病毒也能够被O型和Asia1型FMDV的多克隆抗体识别。这2个研究表明，不同血清型FMDV间嵌合高度易变的G-H环抗原表位，提高了病毒的交叉反应性和疫苗的交叉保护能力，拓展了FMD疫苗的抗原谱。尽管已有不同血清型间G-H环替换提高FMDV交叉反应性的报道，但到目前为止，O型血清型内G-H环替换对FMDV交叉反应性的影响尚不清楚。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种抗原谱拓展O型口蹄疫病毒株及其构建方法和应用，所述口蹄疫病毒株能够同时对近些年流行的O型PanAsia谱系、Mya98谱系、Ind-2001谱系和Cathay谱系口蹄疫病毒株具有较好的交叉反应性，大大拓展了病毒疫苗的抗原谱，有利于提高我国当前O型口蹄疫的有效防控。