[发明专利]一种软体动物通用宏条形码扩增引物及其应用方法

权利要求书

1.一种软体动物通用宏条形码扩增引物，其特征在于：包括a)、b)、c)组中至少一组引物对序列，所述a)、b)、c)各组中的引物序列如下：

a)M18-1F，所述M18-1F的核苷酸序列为GGATAACTGTGGNAATTCNAGA，

M18-1R，所述M18-1R的核苷酸序列为CCTGATTCCCCGNTACCCGT；

b)M18-2F，所述M18-2F的核苷酸序列为AAGCTCGTAGTTGGATCTC，

M18-2R，所述M18-2R的核苷酸序列为TCCAAGAATTTCACCTCT；

c)M18-3F，所述M18-3F的核苷酸序列为CCGATAACGAACGAGACTC；

M18-3R，所述M18-3R的核苷酸序列为GGGAATTCCTCGTTCANGGG。

2.权利要求1所述的软体动物通用宏条形码扩增引物应用，其特征在于：包括如下(1)或(2)或(3)或(4)：

(1)鉴定或辅助鉴定待测DNA是否为软体动物的DNA；

(2)制备用于鉴定或辅助鉴定待测DNA是否为软体动物的试剂盒；

(3)检测待测样本中是否含有软体动物；

(4)制备用于检测待测样本中是否含有软体动物的试剂盒。

3.根据权利要求2所述的软体动物通用宏条形码扩增引物应用，其特征在于：所述(3)的应用还包括：

(5)软体动物物种鉴定和软体动物多样性分析；

(6)软体动物濒危物种和软体动物入侵物种监测；

(7)软体动物的进化、系统发育、系统地理学、遗传多样性分析。

4.根据权利要求3所述的软体动物通用宏条形码扩增引物应用，其特征在于：所述待测样本包括环境源DNA及生物源DNA，所述环境源DNA包括水样DNA、沉积物DNA及生物膜DNA。

5.根据权利要求2-4任一所述的软体动物通用宏条形码扩增引物应用，其特征在于：包括如下步骤：

(S1)待测DNA的提取；

(S2)目的片段的扩增：对步骤(S1)提取得到的待测DNA进行PCR扩增，其中，扩增引物所述的软体动物通用宏条形码扩增引物；

(S3)对步骤(S2)中的扩增产物进行高通量测序；或对步骤(S2)中扩增产物的软体动物进行群落多样性分析。

6.根据权利要求5所述的软体动物通用宏条形码扩增引物应用，其特征在于：所述步骤(S2)进行PCR扩增的过程中，若采用M18-1F与M18-1R引物进行PCR反应，采用的退火温度为55-57℃，产物长度为200-300bp；若采用M18-2F与M18-2R引物进行PCR反应，采用的退火温度为53-56℃，产物长度为280-350bp；若采用M18-3F与M18-3R引物进行PCR反应，采用的退火温度为52-55℃，产物长度为250-320bp。

7.根据权利要求5所述的软体动物通用宏条形码扩增引物应用，其特征在于：所述步骤(S1)操作如下：用采泥器采集沉积物，清洗沉积物，将沉积物中的软体动物挑出，浸泡与75％的酒精中常温保存数日，加入酒精离心，然后放入-80冰箱预冷一段时间，在-40℃下进行真空冻干，去除所有液体，然后利用组织提取试剂盒提取DNA。