[发明专利]中药材中黄曲霉毒素B1的测定方法

权利要求书

1.中药材中黄曲霉毒素B₁的测定方法，其特征在于：包括，

样品选取：将200g中药材用粉碎研磨机粉碎至粉末状，使其粒径小于2mm试验筛，混合均匀后缩分至50g，储存于样品瓶中，密闭保存，供检测使用；称取1g中药材试样于50mL离心管中，加入20mL的50％甲醇水溶液，涡旋提取3分钟，4000r/min离心5分钟，上清液备用；

试纸条选取：从包装中取出黄曲霉毒素B₁免疫荧光试纸条，置于孵育器内，25℃恒温孵育5分钟，待用；

取液：准确移取样品选取中试样上清液1.00mL至5mL离心管中，再准确加入溶液稀释剂1.00mL，涡旋混匀；

滴入试纸条：移取取液操作中的试样稀释液100μL至试纸条微孔内，继续孵育10分钟；

获取数据：取出试纸条插入荧光读卡仪卡槽内，读取T/C比值，根据已输入的黄曲霉毒素B₁多段线性标准曲线读取样品中含有黄曲霉毒素的含量X(μg/kg)。

2.根据权利要求1所述的中药材中黄曲霉毒素B1的测定方法，其特征在于：所述黄曲霉毒素B₁免疫荧光试纸条的制备是利用生物信息技术制备黄曲霉毒素B₁的抗原抗体，再将黄曲霉毒素B₁抗体与荧光微球偶联，采用干式间接竞争法制备试纸条。

3.根据权利要求2所述的中药材中黄曲霉毒素B1的测定方法，其特征在于：将荧光微球偶联抗体喷洒固定在纤维垫上，用适当浓度的抗原和二抗在NC膜上划线，将抗原和二抗包埋固定在NC膜上，37°恒温老化24h，形成质控线C线和检测线T线，以样品中黄曲霉毒素B1浓度为横坐标，对应浓度T/C荧光强度比值为纵坐标，绘制多段线性标准曲线，未知浓度样品可通过荧光检测仪读取T/C值，利用多段线性标准曲线求得样品中黄曲霉毒素B₁的含量。

4.根据权利要求3所述的中药材中黄曲霉毒素B1的测定方法，其特征在于：所述多段线性标准曲线的设置称取6份质量为1.00g的样品至于6个50mL离心管中，分别从100ng/mL的黄曲霉毒素B1标准溶液中准确移取0μL，10μL，25μL，50μL，100μL，150μL至上述6个离心管中；按照样品选取、试纸条选取、取液和获取数据的方法读出上述6份加标样品的T/C比值，以加标浓度为横坐标，以T/C比值为纵坐标，建立多段线性标准曲线并输入荧光读卡仪。

5.根据权利要求4所述的中药材中黄曲霉毒素B1的测定方法，其特征在于：所述黄曲霉毒素B₁标准溶液的含量为100ng/mL。

6.根据权利要求1所述的中药材中黄曲霉毒素B1的测定方法，其特征在于：所述溶液稀释剂：取0.5g吐温-20，加入100mL水中，混匀。

7.根据权利要求1所述的中药材中黄曲霉毒素B1的测定方法，其特征在于：所述50％甲醇水溶液的制备为取50mL水与50mL甲醇混匀。