[发明专利]一种定量检测NPM1基因突变的drop-off ddPCR方法和试剂盒有效
| 申请号： | 202110484036.1 | 申请日： | 2021-04-30 |
| 公开（公告）号： | CN113249475B | 公开（公告）日： | 2022-02-11 |
| 发明（设计）人： | 金晔;钱军;林江;徐子浚;闻向梅;马吉春 | 申请（专利权）人： | 镇江市第一人民医院 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京天盾知识产权代理有限公司 11421 | 代理人： | 宋凌林 |
| 地址： | 212000*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 定量 检测 npm1 基因突变 drop off ddpcr 方法 试剂盒 | ||
1.一种采用drop-offddPCR定量检测NPM1基因突变的试剂盒，其特征在于，包含针对NPM1基因的特异性引物对和探针，其中引物的序列如下：
NPM1正向引物：5’-ATGAAGTGTTGTGGTTCCTT-3’
NPM1反向引物：5’-CAGAAATGAAATAAGACGGAAAA-3’；
所述探针序列如下：
NPM1突变位点野生型探针：5’-FAM-AGATCTCTGGCAGTGGAGG-BHQ1-3’
NPM1突变位点外野生型探针：5’-VIC-TGTTTAAACTATTTTCTTAAAGAGACT-BHQ1-3’，
其中，突变位点探针5’端标记荧光基团FAM，探针3’端标记荧光淬灭基团BHQ1，突变位点外探针5’端标记荧光基团VIC，探针3’端标记荧光淬灭基团BHQ1。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括NPM1突变型及野生型质粒分别作为阳性和阴性对照。
3.根据权利要求1-2任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述基因突变为NPM1第12外显子863位核苷酸后的多种插入突变。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述插入突变选自A型、B型、D型和罕见型。
5.一种试剂盒在制备采用drop-offddPCR定量检测NPM1基因突变的试剂中的应用，其特征在于，包含针对NPM1基因的特异性引物对和探针，其中引物的序列如下：
NPM1正向引物：5’-ATGAAGTGTTGTGGTTCCTT-3’
NPM1反向引物：5’-CAGAAATGAAATAAGACGGAAAA-3’；
所述探针序列如下：
NPM1突变位点野生型探针：5’-FAM-AGATCTCTGGCAGTGGAGG-BHQ1-3’
NPM1突变位点外野生型探针：5’-VIC-TGTTTAAACTATTTTCTTAAAGAGACT-BHQ1-3’，
其中，突变位点探针5’端标记荧光基团FAM，探针3’端标记荧光淬灭基团BHQ1，突变位点外探针5’端标记荧光基团VIC，探针3’端标记荧光淬灭基团BHQ1。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括NPM1突变型及野生型质粒分别作为阳性和阴性对照。
7.根据权利要求5-6任一项所述的应用，其特征在于，所述基因突变为NPM1第12外显子863位核苷酸后的多种插入突变。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述插入突变选自A型、B型、D型和罕见型。
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