[发明专利]微流控芯片及其用途

说明书

本发明公开了一种微流控芯片及其用途，其包括反应芯片和位于其上方用于过滤并收集待测物的过滤片，反应芯片上设置有出样口、至少一进样口和若干通过流道连通的功能腔，每个进样口分别对应连通一个进液口，进液口将相应液体导入功能腔或流道。本发明基于微流控芯片技术，结合亲和性富集法及物理特性法，将两种技术手段集成在微流控芯片上，对血液样本中稀有细胞进行分离、捕获及富集，获得纯度较高的富集细胞样本液，通过免疫荧光染色法准确地对血液样本中稀有细胞进行计数；同时将免疫荧光染色检测法集成到微流控芯片上，避免人为因素干扰，降低人工误差，提高检测的准确度，加快检测速度的同时降低试剂成本及设备成本，有利于实现检测工程化。

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及一种微流控芯片及其用途，尤其是微流控芯片在检测稀有细胞中的用途和方法。

背景技术

稀有细胞(rare cells)是指每毫升样本中个数少于1000个的细胞，人体循环系统中的稀有细胞主要包括循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells，CTCs)、循环内皮细胞(Circulating Endothelial Cells，CECs)，循环内皮祖细胞(circulatingendothelialprogenitor cells，cEPCs)、干细胞和母体血液中的胎儿细胞。

不同个体的循环系统中稀有细胞的数量存在着差异，且人体在健康状态下、不同疾病状态和同一疾病的不同阶段，体内的稀有细胞数量均存在差异，且稀有细胞与疾病有着密切联系，例如，CTCs及循环肿瘤微栓(circulating tumormicroemboli，CTM)被认为是肿瘤转移和复发的重要原因和标志物，其存在既代表了原发灶肿瘤的侵袭能力，也预示了在远端形成转移灶的可能性，具有重要的临床意义，对单位体积内血液中CTCs及CTM数量的精确检测，即是癌症的早期筛查提供重要依据，也能够为肿瘤患者病情发展提供动态监控及预后依据；同时，对CTCs及CTM的精准筛选、富集及检测可为肿瘤细胞致病机制及耐药机制提供研究窗口。

因此，对稀有细胞进行分离、提纯、富集及检测分析对于临床医学有着重要意义，相对于外周血中存在的其他正常血细胞，稀有细胞的浓度极低，检测难度较大。

而对目标细胞进行精确筛选、富集及释放是实现可靠检测的前提条件，目前针对稀有细胞的检测方法主要包括流式细胞仪检测法、荧光原位杂交法、实时定量PCR及免疫荧光染色法。

流式细胞仪检测法的检测速度快，可同时进行多通道检测，但其检测灵敏度较低，对细胞数量要求较高，且无法观察细胞形态；荧光原位杂交法可实现分子水平的检测，临床应用成熟，然而当选择的探针长度较短时易导致杂交效率低的现象，准确度较低；实时定量PCR可检测靶细胞内RNA，检测灵敏度高，但受RNA易降解、易污染的特点限制，会导致出现假阳性的概率较大，限制其临床应用推广，同时，上述方法需要对样品进行复杂的前处理，且试剂消耗量大，试剂成本及设备成本高。

免疫荧光染色法可观察到清晰的细胞形态，检测灵敏度高，是目前最为常用的检测方法，但其观察到的细胞形态多样，统计计数准确性受样本纯度及样本液体积影响较大，导致结果的准确度较低。

因此，现有的检测法在检测稀有细胞时，均存在准确度较低的问题。

发明内容

本发明旨在提供一种微流控芯片及其应用，能够对血液样本中的稀有细胞进行分离、捕获及富集，获得纯度较高的富集细胞样本液，加快检测速度的同时降低试了剂成本及设备成本。

为了实现上述目的根据本发明的一个方面，提供了一种微流控芯片，包括反应芯片以及位于其上方的过滤片，所述过滤片用于过滤并收集待测物；所述反应芯片上设置有出样口、至少一进样口和若干功能腔，所述功能腔通过流道连接，每个进样口分别对应联通一个进液口，进液口将相应的液体导入功能腔或流道。